敲低PVT1通过激活LATS2/Hippo信号通路抑制管腔型和基底样乳腺癌细胞增殖的机制研究

本研究针对乳腺癌（BC）治疗中存在的耐药性问题，探索了长链非编码RNA（lncRNA）PVT1在管腔型和基底样亚型中的致癌机制。研究人员通过TCGA数据库筛选发现PVT1在两种亚型中异常高表达，进一步实验证实敲低PVT1可通过稳定LATS2 mRNA激活Hippo通路，抑制YAP核转位，从而显著抑制癌细胞增殖。该研究为开发跨亚型联合靶向治疗策略提供了新靶点，具有重要临床转化价值。

　　

乳腺癌作为威胁女性健康的头号恶性肿瘤，其治疗面临严峻挑战——不同分子亚型对治疗响应差异显著，耐药性问题尤为突出。管腔型乳腺癌虽对内分泌治疗敏感，但41%患者会在15年内复发；基底样乳腺癌则因缺乏有效靶点，预后极差。现有PIK3CA和CDK4/6等靶向药物虽取得进展，但寻找能跨越亚型的新型靶分子仍是当务之急。近年研究发现，长链非编码RNA（lncRNA）在肿瘤发生中扮演关键角色，其中PVT1作为8q24染色体上的致癌基因，在多种癌症中异常表达，但其在乳腺癌多亚型中的共性机制尚未阐明。

杭州妇女医院药剂科的研究团队通过TCGA数据库分析发现，PVT1在管腔型和基底样乳腺癌组织中显著高表达，且与晚期临床分期相关。为揭示其分子机制，研究人员采用RNA干扰技术敲低PVT1后，通过MTS、平板克隆形成、EdU掺入等实验证实PVT1缺失可抑制癌细胞增殖，并诱导G0/G1期阻滞。RNA测序分析揭示Hippo信号通路被显著激活，Western blot和免疫荧光显示LATS2表达上调、YAP磷酸化增强及核转位减少。进一步机制研究发现PVT1通过调控LATS2 mRNA稳定性影响Hippo通路活性，双基因敲除实验证实LATS2介导了PVT1的促增殖作用。

研究采用的关键技术包括：1）基于TCGA数据库的生物信息学分析筛选差异表达lncRNA；2）siRNA转染实现基因敲低；3）MTS、克隆形成和流式细胞术检测细胞增殖与周期；4）RNA测序和KEGG通路富集分析；5）mRNA稳定性实验结合放线菌素D处理；6）免疫荧光观察YAP亚细胞定位。

PVT1在管腔和基底样BC组织中异常高表达
TCGA数据分析显示，PVT1在683例管腔型和169例基底样乳腺癌组织中表达量分别是癌旁组织的2.3倍和3.1倍（P<0.001）。临床关联分析发现，PVT1高表达与管腔型患者TNM III期显著相关（P=0.013），且预示更差的总生存期（HR=1.47, P=0.038）。

PVT1敲低抑制BC细胞增殖
在MCF7（管腔型）和BT549（基底样）细胞中，PVT1 siRNA转染使细胞活力下降42%-58%（P<0.01），克隆形成减少63%-71%（P<0.001），EdU阳性细胞比例降低55%-60%（P<0.01）。流式细胞术显示G0/G1期细胞比例增加18.7个百分点（P<0.05）。

Hippo通路激活机制解析
RNA测序发现PVT1敲除后Hippo通路相关基因显著富集（P=1.2×10^-4）。实验验证显示LATS2 mRNA和蛋白水平分别上调2.1倍和1.8倍（P<0.01），YAP Ser127位点磷酸化增加3.2倍（P<0.001），核内YAP荧光强度降低64%（P<0.001）。下游靶基因CYR61、MYC表达量下降50%-65%（P<0.05）。

LATS2介导的功能救援
放线菌素D实验证实PVT1敲低使LATS2 mRNA半衰期从4.2小时延长至7.8小时（P<0.01）。共转染LATS2 siRNA可部分逆转PVT1敲低导致的YAP磷酸化（恢复率61%）和细胞增殖抑制（恢复率55%，P<0.05）。

该研究首次阐明PVT1通过LATS2/Hippo通路调控乳腺癌细胞增殖的跨亚型机制：PVT1通过降低LATS2 mRNA稳定性抑制Hippo通路，促进YAP核转位驱动细胞周期进展。这一发现不仅为理解乳腺癌异质性提供了新视角，更提示PVT1可作为联合靶向治疗的潜在靶点——针对管腔型患者可联合内分泌治疗延缓耐药，对基底样患者则可能提供新的治疗选择。研究采用的"数据库筛选-功能验证-机制解析"策略，也为lncRNA研究提供了范式参考。随着RNA靶向技术的发展，基于PVT1的反义核苷酸（ASO）或纳米载体给药系统有望成为乳腺癌精准治疗的新方向。