量子点免疫层析试纸条快速灵敏检测H5亚型禽流感病毒的研究

本研究针对H5亚型禽流感病毒(AIVs)的高致病性和跨物种传播风险，开发了基于量子点荧光微球(QDFM)的免疫层析试纸条(QDFM-ICS)。研究人员通过小鼠免疫获得单克隆抗体2F2和2B7，将其与量子点偶联构建检测系统，实现了对活病毒0.0625 HAU/80μL和纯化H5N6血凝素蛋白1.2 ng/mL的检测限，特异性达100%，与实时PCR检测结果高度一致。该技术为H5亚型AIVs的现场快速检测提供了新工具。

　　

禽流感病毒(AIVs)一直是全球公共卫生的重大威胁，其中H5亚型因其高致病性和跨物种传播能力备受关注。自1996年香港首次报道高致病性H5N1病毒以来，该病毒已演化出多个分支(clade 2.3.4.4等)，导致家禽大规模感染和人类死亡病例。截至2025年，WHO统计显示H5N1已造成全球24个国家964例人类感染，死亡率高达48%。更令人担忧的是，近年来H5病毒不断突破物种屏障，感染奶牛、海豹等哺乳动物，显示出大流行潜力。然而，传统检测方法如ELISA和RT-PCR存在设备依赖性强、耗时长等局限，亟需开发快速、灵敏的现场检测技术。

浙江大学医学院附属第一医院的研究团队在《Virology Journal》发表了一项突破性研究。他们利用量子点(QDs)的荧光特性，结合特异性单克隆抗体，开发出量子点荧光微球免疫层析试纸条(QDFM-ICS)。该技术仅需15分钟即可完成检测，灵敏度比传统方法提高数十倍，为H5亚型AIVs的监测防控提供了有力工具。

研究采用了几项关键技术：1)通过杂交瘤技术制备靶向H5血凝素(HA)的单克隆抗体；2)量子点与抗体的共价偶联技术；3)免疫层析试纸条的组装优化；4)使用临床样本(喉拭子、泄殖腔拭子和粪便)进行验证。实验涉及32种不同亚型AIVs和12种其他禽类病毒的特异性测试。

单克隆抗体的表征
研究人员用H5N6病毒(A/duck/Zhejiang/6D2/2013)免疫小鼠，获得两株IgG2a型单克隆抗体2F2和2B7。免疫荧光(IFA)显示它们能特异性结合H5N1、H5N2、H5N6和H5N8病毒，而与其他亚型无交叉反应。抗体逃逸实验发现2F2靶向HA受体结合域(RBD)的R239S位点，2B7作用于糖基化位点A172T，这两个位点在流行毒株中保守性超过90%。

QDFM-ICS性能评估
试纸条对活病毒的检测限达0.0625 HAU，相当于传统方法1/32的检测阈值。对纯化H5N6 HA蛋白灵敏度为1.2 ng/mL。重复实验显示变异系数(CV)<10%，室温保存3个月性能稳定。特别值得注意的是，在160份临床样本检测中，与实时PCR结果完全一致，证实了其可靠性。

实际应用价值
这项研究解决了H5亚型AIVs现场检测的技术瓶颈。QDFM-ICS无需复杂设备，15分钟即可获得结果，适合养殖场、口岸等场景的快速筛查。其高灵敏度可早期发现病毒感染，为疫情防控争取宝贵时间。此外，研究中鉴定的保守抗原表位为疫苗设计提供了新靶点。

该技术的成功开发标志着禽流感检测进入"量子点时代"，为应对可能出现的H5病毒大流行提供了重要技术储备。未来可进一步拓展至其他高致病性病毒检测，具有广阔的临床应用前景。