儿童HIV暴露及采血至PBMC分离时间对细胞产量与活性的影响：高HIV流行区的关键发现

本研究针对高HIV流行区儿童样本，探讨了采血至PBMC分离时间（TPP）和早期HIV/ART暴露对PBMC及NK细胞产量与活性的影响。结果显示TPP超过3小时会显著降低细胞活性，HIV感染（非暴露）可提高PBMC产量，而性别差异影响淋巴细胞频率。该研究为优化儿童免疫研究样本处理提供了关键时间阈值，发表于《Journal of Immunological Methods》。

　　

在撒哈拉以南非洲等高HIV流行地区，儿童早期HIV暴露和抗逆转录病毒治疗（ART）对免疫系统的长期影响仍是未解之谜。尤其令人担忧的是，HIV暴露但未感染（HEU）儿童的免疫异常可能增加其感染风险。与此同时，实验室研究中外周血单个核细胞（PBMC）的质量直接影响免疫功能评估的可靠性，而采血至处理的时间延迟（TPP）这一常见操作变量对儿童小体积样本的影响尚未明确。

针对这一双重挑战，津巴布韦大学出生队列研究（UZBCS）团队在《Journal of Immunological Methods》发表了一项关键研究。研究人员聚焦112名5岁儿童（含HIV暴露/感染不同亚群），通过密度梯度离心法分离PBMC，结合CD14/CD3/CD19抗体排除单核细胞和T/B淋巴细胞，采用CD16/CD56标记与死活染料鉴定NK细胞，系统分析了TPP和HIV/ART暴露对细胞参数的影响。

主要技术方法
研究采用EDTA抗凝血，通过Ficoll密度梯度离心分离PBMC，台盼蓝染色评估活力；流式细胞术使用CD14/CD3/CD19抗体组合排除单核细胞和淋巴细胞，CD16/CD56与死活染料标记鉴定NK细胞；样本来自津巴布韦哈拉雷高密度社区的UZBCS队列，包含HIV未暴露未感染（HUU）、HIV暴露长期/中期ART暴露（HEULT/HEUMT）及HIV感染（HEI）儿童。

研究结果

1. 人口统计学特征：纳入112名儿童（50%女性），中位年龄5.1岁，包括37例HUU、36例HEULT、34例HEUMT和5例HEI。HEI儿童PBMC产量/ml略高（p=0.092）。

2. TPP的关键影响：中位TPP为90分钟，超过3小时处理会使PBMC产量从2.8×10⁶ cells/ml降至1.3×10⁶ cells/ml（p=0.010），活力>95%的阈值在3小时内保持。TPP与产量/活力呈负相关（r=-0.35/-0.47，p<0.001）。

3. HIV/ART暴露效应：仅HIV感染（非暴露）与PBMC产量增加相关，而NK细胞频率（8.2%）不受TPP或暴露状态影响。

4. 性别差异：男性总淋巴细胞频率显著低于女性（18.6% vs 23.8%，p=0.018）。

结论与意义
该研究首次在高HIV负担环境中明确了儿童PBMC处理的"3小时黄金窗口"，为资源有限地区的小体积样本处理提供了实操标准。发现HIV感染（非暴露）可能通过未知机制增强造血功能，而早期ART暴露对PBMC参数影响有限，缓解了关于ART长期毒性的担忧。性别差异的发现提示儿童免疫研究需考虑性别分层。这些成果不仅优化了免疫学研究的前分析流程，更为理解HIV暴露儿童的免疫特征奠定了方法学基础。

（注：作者Hope Mataramvura单位津巴布韦大学，研究受Wellcome Trust和德国研究基金会[DFG]资助，声明无利益冲突）