基于肽驱动的侧向层析技术检测猪瘟病毒E2抗原的新型快速诊断方法

针对猪瘟病毒(CSFV)抗体检测存在诊断窗口期的问题，印度国家猪研究中心团队开发了靶向E2抗原的肽基侧向层析检测(LFA)技术。通过生物信息学筛选E2蛋白免疫优势区(354-380aa)，合成肽段并制备多克隆抗体，结合芒果叶提取物生物合成的银纳米颗粒(AgNPs)，建立可检测20 ng/ml CSFV抗原的快速诊断方法，为猪瘟现场监测提供新工具。

　　

猪瘟（Classical Swine Fever, CSF）作为高度传染性病毒病，每年给全球养猪业造成数十亿美元损失。传统抗体检测存在7-14天的诊断窗口期，而病毒分离和PCR检测又受限于实验室条件。如何实现早期、快速的现场诊断，成为制约疫情控制的关键瓶颈。印度农业研究委员会-国家猪研究中心（ICAR-National Research Centre on Pig）的Gyanendra Singh Sengar团队在《Journal of Immunological Methods》发表的研究，开创性地将肽基诊断与纳米标记技术相结合，开发出突破性的现场检测方案。

研究采用生物信息学预测与实验验证相结合的策略。通过Bepipred 2.0分析CSFV E2蛋白（GenBank: LC000002.1），锁定354-380氨基酸区域作为免疫优势表位。该肽段经KLH载体偶联后免疫家兔，获得效价达1:51200的多克隆抗体。创新性地采用芒果叶提取物生物合成直径40-60nm的银纳米颗粒（AgNPs），经FTIR证实其表面富含羧基等活性基团。将纯化抗体与AgNPs偶联后构建的LFA试纸条，实现肉眼可见的20 ng/ml检测限，且与ASFV、PRRSV等常见猪病病原无交叉反应。

【Peptide sequences designing and mass spectrometry】部分揭示，E2蛋白354-380区域具有高于阈值1.0的抗原性评分（图2a），经质谱验证合成肽段分子量与理论值（3024.5 Da）吻合。ELISA证实该肽段抗体对CSFV标准株的半数抑制浓度（IC₅₀）为0.78 μg/ml。

【Characterization of CSFV-E2 peptide】显示，DLS分析显示抗体-AgNPs复合物粒径增至85nm，Zeta电位-21.3mV，确保良好的胶体稳定性。试纸条在4℃储存60天后仍保持90%以上活性，满足热带地区现场使用需求。

【Discussion】部分强调，相比重组蛋白，合成肽段具有批次稳定性好（CV<5%）、生产成本低（节约60%）、耐高温（37℃下稳定7天）等优势。该技术突破传统LFA依赖单克隆抗体的限制，通过精心设计的肽段实现与天然病毒颗粒相似的空间构象识别。

这项研究的意义在于：首次建立CSFV肽基LFA检测体系，将诊断时间窗口提前至感染后48小时；创新的植物源AgNPs标记技术避免化学合成毒性；检测成本降至传统ELISA的1/10。为发展中国家猪瘟防控提供符合"One Health"理念的解决方案，相关技术路线可拓展至非洲猪瘟（ASFV）等其它动物疫病诊断领域。国家博士后科学基金（PDF/2022/000647）的支持也体现了该研究的社会价值。