基于鼠伤寒沙门氏菌OmpA的外膜囊泡工程化改造及其通过AID表达调控人类B细胞功能的研究

为解决鼠伤寒沙门氏菌感染引发的免疫逃逸和抗生素耐药性问题，研究人员通过工程化改造携带OmpA的外膜囊泡（OmpA-OMVs），系统研究了其对人类B细胞功能的影响。研究发现，OmpA-OMVs通过TLR2/NF-κB信号通路上调AID表达，促进类别转换重组（CSR）和IgA产生，为抗沙门氏菌疫苗开发提供了新策略。

　　

鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella enterica serovar Typhimurium）是引发食源性胃肠炎的重要病原体，其日益严重的抗生素耐药性对全球公共卫生构成威胁。传统疫苗开发面临抗原免疫原性不足、递送效率低等挑战。外膜囊泡（Outer Membrane Vesicles, OMVs）作为革兰氏阴性菌天然分泌的纳米级载体，兼具抗原递送和免疫佐剂功能，成为新型疫苗设计的突破口。

印度理工学院印多尔分校（Indian Institute of Technology Indore）的研究团队在《Microbial Pathogenesis》发表的研究中，创新性地利用大肠杆菌BL21(DE3)表达鼠伤寒沙门氏菌外膜蛋白A（OmpA），制备重组OmpA-OMVs，通过流式细胞术、Western blotting、染色质免疫沉淀等技术，系统解析了其对人类B细胞系Raji的免疫调控机制。

关键技术方法
研究采用基因工程手段构建pET43a-OmpA重组质粒，通过超速离心法分离OMVs；使用动态光散射（DLS）和透射电镜（TEM）表征囊泡特性；采用RT-qPCR和免疫荧光检测B细胞中TLR2、AID等分子表达；通过染色质免疫沉淀（ChIP）分析转录因子cMYC与染色质结合动态。

主要研究结果

1. 重组OMVs的构建与表征
   成功获得直径约120 nm的OmpA-OMVs，SDS-PAGE显示38 kDa特征条带，免疫印迹验证OmpA正确整合至囊泡膜结构。

2. TLR2/NF-κB信号通路激活
   OmpA-OMVs刺激显著上调B细胞TLR2表达（3.5倍），促进NF-κB核转位，证实其通过模式识别受体（PRRs）启动免疫应答。

3. AID表达调控网络
   刺激后AID mRNA水平增加4.2倍，伴随转录激活因子cMYC、PAX5、STAT6表达上调（p<0.01），而抑制因子cMYB下降60%。ChIP证实cMYC在AID启动子区富集度随时间递增。

4. 类别转换重组功能验证
   IgA分泌量提升2.8倍，IgM/IgA转换效率提高，证实OmpA-OMVs有效促进抗体类型转换。

研究意义
该研究首次阐明OmpA-OMVs通过TLR2-NF-κB-cMYC轴调控AID表达的分子机制，突破传统纯化蛋白免疫原性不足的限制。相较于游离OmpA，囊泡递送系统使AID诱导效率提升40%，为抗沙门氏菌黏膜疫苗设计提供了三大优势：①保持OmpA天然构象；②纳米尺寸增强淋巴组织靶向性；③内源佐剂成分协同激活免疫。研究团队指出，该平台技术可扩展至其他病原体OMPs的递送，对耐药菌感染防控具有重要转化价值。