Senecavirus A VP1蛋白构象表位的单克隆抗体与噬菌体展示技术鉴定及其在疫苗设计与诊断中的应用

本研究针对Senecavirus A（SVA）引发的猪业经济损失问题，通过制备8株靶向VP1的中和性单抗（NAbs），结合噬菌体展示技术首次鉴定出6个构象表位（如6D26识别的“SHHLGPAPHFLA”及关键残基H162/G165/P168/F171），为SVA疫苗设计、诊断及治疗策略提供新靶点。

　　

近年来，Senecavirus A（SVA，又称Seneca Valley Virus）在全球养猪场引发的水疱性疾病和仔猪死亡事件频发，其临床症状与口蹄疫等难以区分，给生猪产业造成巨大经济损失。作为小RNA病毒科（Picornaviridae）的新成员，SVA的VP1蛋白因其相对保守的氨基酸序列和诱导中和抗体的能力，成为疫苗研发的关键靶点。然而，此前报道的表位多为线性表位，构象表位的鉴定仍是空白。

为解决这一问题，河北农业大学的研究团队在《Veterinary Microbiology》发表了一项突破性研究。他们通过表达纯化重组VP1蛋白，成功制备了8株具有中和活性的单克隆抗体（NAbs），并首次利用噬菌体展示技术鉴定了6个构象表位。研究发现，抗体6D26识别的表位“SHHLGPAPHFLA”中，H₁₆₂、G₁₆₅、P₁₆₈和F₁₇₁是关键残基；而6D22结合的“HGAVRTGTWLAQ”则涉及H₁₆₂、G₁₆₅、A₁₇₂等位点。间接免疫荧光（IFA）验证了这些构象表位的有效性。

研究采用三大关键技术：1）重组VP1蛋白的原核表达与纯化；2）杂交瘤技术制备单抗；3）噬菌体展示肽库筛选表位。结果显示，除上述表位外，4A1、4A2和4A20分别识别“HTAIQPVAHPIV”“SSQSASWPAWLA”和“NHPGSWISALDW”，而6D25和4A3的相互作用涉及多个分散残基（如P₁₃₂、L₂₀₁、W₂₁₄等）。

在讨论部分，作者强调这些构象表位的发现填补了SVA免疫学研究空白。VP1蛋白的环状结构更易形成抗原位点，如E2（48-72 aa）位于BC环，E3（92-109 aa）位于CD-II环。与既往线性表位研究（如Fan等报道的²¹GELAAP²⁶）相比，本研究揭示了更复杂的空间构象特征，为多表位疫苗设计奠定基础。

结论部分指出，该研究不仅丰富了SVA VP1的B细胞表位图谱，其鉴定的中和性单抗可直接用于诊断试剂开发。第一作者Limin Li（李丽敏）团队的工作为应对SVA疫情提供了双重解决方案——既可通过表位指导疫苗优化，又能利用单抗建立快速检测方法。这项由河北省青年拔尖人才计划（2018年批次）资助的研究，标志着我国在动物病毒免疫学研究领域的重要进展。