SRRM3劫持神经剪接程序驱动胰腺神经内分泌肿瘤进展：微外显子靶向治疗新策略

胰腺神经内分泌肿瘤（PanNETs）因激素分泌失调导致临床管理困难，其机制尚未明确。本研究首次揭示RNA结合蛋白SRRM3通过异常调控神经特异性微外显子（microexons）剪接，驱动肿瘤进展的核心机制。研究发现，SRRM3在PanNETs中特异性高表达，促进CADPS2、CACNA1D等基因的微外显子异常纳入，破坏钙信号（Ca2+）传导和胰岛素囊泡运输。通过剪接转换型反义寡核苷酸（ASOs）靶向关键微外显子，可显著抑制肿瘤生长并逆转神经内分泌表型，为临床提供新型精准治疗策略。

　　

论文解读

胰腺神经内分泌肿瘤（Pancreatic Neuroendocrine Tumors, PanNETs）虽仅占胰腺肿瘤的3%，却是临床管理的重大挑战。这类肿瘤常伴随胰岛素等激素的异常分泌，引发致命性低血糖或代谢紊乱。尽管基因组研究已描绘其突变图谱，但驱动激素分泌失调的核心机制仍不明确，导致靶向治疗进展缓慢。选择性剪接（alternative splicing, AS）作为基因表达调控的关键环节，在多种癌症中参与肿瘤恶化，但其在PanNETs中的作用犹如未被探索的"暗物质"。

为破解这一谜题，希腊基础生物医学研究中心（BSRC "Alexander Fleming"）与西班牙基因组调控中心（Centre for Genomic Regulation, CRG）的研究团队展开联合攻关。他们通过分析62例PanNET患者与67例正常组织的RNA测序数据，发现肿瘤中存在大规模剪接异常事件，其中473个外显子呈现异常高纳入。生物信息学挖掘锁定神经剪接因子SRRM3为关键调控者——该因子在正常胰腺中几乎不表达，却在PanNETs中暴增至神经组织水平。进一步研究揭示，SRRM3通过识别UGG基序驱动一组保守的神经微外显子（长度<27 nt）异常剪接，重塑钙信号传导与囊泡运输网络，最终促进肿瘤进展。这一突破性发现发表于《Cell Reports》，为PanNETs治疗提供全新视角。

关键技术方法

研究整合多组学分析与实验验证：

1. 跨物种剪接图谱分析：比对人类（GSE118014、EGAS00001001732）和小鼠（RIP1-Tag2模型）PanNETs的RNA测序数据，筛选保守剪接事件；
2. 功能模型构建：利用PanNET细胞系（QGP-1/BON-1/NT-3）及移植瘤模型（NOD-SCID小鼠），通过shRNA/siRNA敲低SRRM3；
3. 剪接干预策略：设计2'-O-甲基硫代反义寡核苷酸（ASOs）靶向CADPS2/CACNA1D/PTK2基因的微外显子剪接受体位点；
4. 动态生理监测：采用钙成像技术（Fluo-4/AM）检测葡萄糖刺激下Ca²⁺瞬变，结合双荧光胰岛素分泌报告系统（RINS1）量化胞吐功能；
5. 多尺度表型验证：通过3D超声监测移植瘤生长，质谱（LC-MS/MS）分析剪接异构体蛋白表达。

研究结果

SRRM3驱动PanNETs的神经剪接程序
通过比较正常胰岛与PanNETs的剪接图谱，发现704个显著差异外显子事件（|△PSI|>15%），其中83%的微外显子异常高纳入（图1B）。SRRM3表达与473个外显子纳入呈强正相关（r>0.6），其结合基序富集于这些外显子上游（图2B-C）。在RIP1-Tag2小鼠模型中，SRRM3在肿瘤进展中表达激增60倍（图2E），伴随CADPS2（外显子19）、CACNA1D（外显子44）等神经微外显子纳入率阶梯式上升（图3E）。

微外显子重塑神经内分泌功能
基因本体（GO）分析显示，异常剪接基因富集于轴突发育、囊泡运输和突触信号通路（图3B）。机制上：

• CADPS2微外显子（编码3个氨基酸）破坏其与多巴胺受体DRD2互作，导致胰岛素囊泡锚定障碍；
• CACNA1D微外显子（编码9个氨基酸）延缓L型钙通道Cav1.3失活，延长Ca²⁺内流（图S4A）；
• PTK2微外显子改变黏着斑激酶FAK1自磷酸化位点，损害高尔基体完整性（图5D-E）。
  SRRM3敲低后，细胞对葡萄糖刺激的Ca²⁺响应衰减＞50%（图4F-G），胰岛素分泌减少60%（图5A-C）。

靶向剪接阻断肿瘤进展
SRRM3沉默使PanNET细胞增殖率下降40%（图6A），移植瘤重量减轻70%（图6D）。ASOs靶向干预关键微外显子（CADPS2/CACNA1D/PTK2），成功模拟SRRM3敲除表型：微外显子跳过率达80%（图6G），细胞增殖与球体形成能力显著抑制（图6H, S6H）。值得注意的是，ASOs联合应用可逆转神经表型——神经标志物TUBB3、Pgp9.5表达回调至正常水平（图7E），证实SRRM3-微外显子轴是PanNETs神经内分泌转化的核心驱动力。

结论与意义

本研究首次揭示PanNETs通过"劫持"神经特异性剪接程序驱动肿瘤进展的全新机制：SRRM3异常高表达迫使神经元微外显子（如CADPS2/CACNA1D/PTK2）在胰腺细胞中错误纳入，进而破坏胰岛素囊泡运输、放大钙信号紊乱，最终促进肿瘤恶性转化。其核心突破在于：

1. 机制创新性：发现神经剪接程序在非神经肿瘤中的致病作用，为癌症异质性研究开辟新方向；
2. 诊断价值：SRRM3表达水平与肿瘤分期正相关（图S2C），可作为PanNETs分级的新型分子标志物；
3. 治疗转化：剪接转换型ASOs在动物模型中显著抑制肿瘤生长，为临床提供无需基因突变的普适性治疗策略。

研究的局限性在于SRRM3蛋白检测受限于抗体可用性，且人类类器