Euphorbia cotinifolia L.叶甲醇提取物通过TAK1介导的NF-κB/MAPK抑制和Nrf2激活途径减轻RAW 264.7巨噬细胞炎症与氧化应激

本研究针对炎症性疾病治疗中非甾体抗炎药(NSAIDs)副作用严重的问题，通过探究Euphorbia cotinifolia L.叶甲醇提取物(MECL)对LPS刺激的RAW 264.7巨噬细胞的调控作用，发现其通过抑制TAK1磷酸化阻断NF-κB/MAPK信号通路，同时激活Nrf2抗氧化通路，显著降低NO、PGE2及促炎因子(IL-6/IL-1β/TNF-α)水平，为开发新型天然抗炎药物提供了分子机制依据。

　　

炎症是机体对抗感染和损伤的重要防御机制，但过度炎症反应会导致心脏病、糖尿病等慢性疾病。目前临床常用的非甾体抗炎药(NSAIDs)长期使用易引发胃肠黏膜损伤等副作用，亟需开发更安全的替代疗法。植物提取物因其多靶点作用和低毒性成为研究热点，大戟属植物Euphorbia cotinifolia L.在传统医学中具有抗菌、抗病毒等应用，但其抗炎和抗氧化分子机制尚未阐明。

韩国生物科学与生物技术研究院(Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology, KRIBB)的研究团队通过系统研究，首次揭示该植物叶甲醇提取物(MECL)可通过靶向调控TAK1-NF-κB/MAPK-Nrf2信号网络，在RAW 264.7巨噬细胞模型中实现抗炎与抗氧化双重功效，相关成果发表于《Biomedicine》。

研究人员采用细胞活力检测(CCK-8法)、ELISA、免疫印迹(Western blot)、荧光报告基因检测、实时定量PCR(qRT-PCR)和激光共聚焦显微镜等技术，结合DPPH自由基清除实验和细胞内活性氧(ROS)检测，系统评估了MECL在LPS诱导的炎症模型中的作用机制。

3.1 MECL对炎症介质的影响
研究发现MECL(≤50 μg/mL)无细胞毒性，可剂量依赖性抑制LPS诱导的NO和PGE₂产生，下调诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧合酶-2(COX-2)的蛋白与mRNA表达，其中对iNOS的抑制作用更为显著。

3.2 对促炎因子的调控
MECL显著降低IL-6、IL-1β和TNF-α的分泌与基因表达，对IL-6/IL-1β的抑制效果强于TNF-α，这与后续发现的NF-κB通路优先抑制现象一致。

3.3 转录因子调控特征
荧光素酶报告实验显示MECL对NF-κB启动子活性的抑制强度(70%以上)显著高于AP-1(约30%)，印证了其对不同炎症靶基因的选择性调控。

3.4 信号通路解析
免疫印迹证实MECL通过抑制TAK1(Thr184/187)磷酸化，阻断IKKα/β-IκBα-NF-κB p65级联反应，同时减少JNK/ERK/p38 MAPK的活化。共聚焦显微镜直观显示MECL可阻止NF-κB p65核转位。

3.5 抗氧化机制
虽然DPPH实验显示MECL直接自由基清除能力较弱，但细胞实验证实其通过上调Nrf2蛋白、促进Keap1降解，显著诱导血红素加氧酶-1(HO-1)和NAD(P)H醌氧化还原酶1(NQO1)表达，降低细胞内ROS水平。Nrf2抑制剂ML385可逆转HO-1上调，证实该途径的依赖性。

3.6 抑制剂对比研究
与ERK抑制剂U0126、TAK1抑制剂Takinik等阳性对照相比，MECL展现出对多条信号通路的协同抑制效果，提示其多靶点作用特征。

该研究首次在分子水平阐明MECL通过"双通路调控"发挥抗炎抗氧化作用：一方面靶向TAK1抑制下游NF-κB/MAPK信号轴，减少炎症介质释放；另一方面激活Nrf2-Keap1防御系统增强细胞抗氧化能力。这种协同作用模式使其相比传统NSAIDs可能具有更广谱的治疗潜力和更低的副作用风险。研究不仅为大戟属植物的药用价值提供了新证据，也为开发基于天然产物的多靶点抗炎药物奠定了理论基础。后续研究需进一步分离活性单体化合物，并在动物模型中验证其体内药效。