综述：蛋白质调控干眼症泪膜脂质层稳定性的分子视角

这篇综述创新性地采用氢键有机框架（HOFs）固定弹性蛋白酶（ELA），开发了高效可重复使用的配体垂钓技术，从菊科植物（Coreopsis tinctoria）中筛选出7种新型ELA抑制剂（如isookanin、sulfuretin等），其酶负载量（524.4?mg/g）和稳定性（12次循环）显著优于传统方法，为抗皮肤衰老药物开发提供了新策略。

　　

Abstract

氢键有机框架（HOFs）因其温和的合成条件和生物相容性，成为酶固定化的理想载体。本研究通过自组装将弹性蛋白酶（ELA）封装于H₄TBAPy构建的HOFs中，形成ELA@HOF纳米复合物。表征显示其具有750?nm棒状结构，酶负载量达524.4?mg/g，固定化率85.7%，且酸性稳定性显著提升。

Introduction

配体垂钓技术通过靶蛋白（如ELA）与天然化合物的特异性结合，实现高效筛选。相比传统载体（如磁性颗粒），HOFs避免了共价键对酶活性的损害。ELA作为皮肤弹性蛋白降解的关键酶，其抑制剂可延缓皮肤老化。菊科植物（Coreopsis tinctoria）富含黄酮类化合物，但此前未报道其ELA抑制活性。

材料与方法

通过超声提取获得菊科植物水提物（得率25.5%），利用ELA@HOF进行配体垂钓。UPLC-MS鉴定出7种抑制剂，包括马瑞因（marein）和硫磺菊素（sulfuretin）。分子对接显示这些化合物通过氢键和疏水作用与ELA活性位点结合。

结果

酶动力学研究表明，马瑞因（IC₅₀=0.18?μM）属于竞争性抑制剂，而硫磺菊素（IC₅₀=0.32?μM）为混合型抑制剂。ELA@HOF重复使用12次后活性保持90%，优于MOFs固定化酶（通常<5次）。

Conclusion

HOFs为天然产物活性筛选提供了绿色高效平台，菊科植物中发现的ELA抑制剂为抗衰老药物开发开辟了新途径。未来可拓展至其他靶点如酪氨酸酶的筛选研究。