基于双SPE-UPLC-MS/MS技术的牛组织中多残留抗蠕虫药同步检测方法与药代动力学研究

本研究针对兽用复方氯氰碘柳胺混悬剂中OXY和LEV在牛组织中的残留监测难题，开发了基于双提取-净化策略的UPLC-MS/MS同步检测方法，建立了涵盖肝脏、肾脏、肌肉和脂肪的残留动力学模型，为制定28天统一休药期提供科学依据，对保障食品安全和推动兽药合理使用具有重要意义。

　　

在畜牧业集约化发展的背景下，兽用抗寄生虫药物的广泛使用导致食品动物组织残留问题日益突出。复方氯氰碘柳胺混悬剂作为治疗片形吸虫病和线虫感染的关键药物，其有效成分氯氰碘柳胺(OXY)和盐酸左旋咪唑(LEV)具有截然不同的理化性质——OXY是抑制线粒体氧化磷酸化的水杨酰苯胺类化合物，而LEV作为四氢嘧啶衍生物通过抑制延胡索酸还原酶和激活烟碱型乙酰胆碱受体发挥双重作用。这种化学多样性给多残留检测带来巨大挑战：传统方法难以实现同步提取，且两者在组织中呈现显著差异的分布模式（OXY倾向蓄积在肝脏达11560 μg/kg，LEV则在肾脏达6452 μg/kg）。更严峻的是，各国对兽药最大残留限量(MRL)的监管要求日益严格，欧盟规定OXY在肌肉/脂肪的MRL为20 μg/kg，而中国对LEV在肝脏的限量为10 μg/kg。

中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所的研究团队在《Microchemical Journal》发表的研究，创新性地建立了双固相萃取净化结合超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)的分析体系。该研究选取20头西门塔尔牛(10雌10雄)作为实验对象，通过优化乙腈-丙酮(6:4)液液萃取结合CNWBOND MAX SPE净化OXY/NIC，以及乙酸乙酯提取联合Oasis MCX SPE纯化LEV/MED的两步法策略，成功解决了极性差异药物的同步检测难题。关键技术创新包括：采用Waters ACQUITY PRM BEH C₁₈色谱柱(1.7 μm, 2.1×100 mm)实现13分钟内完成分析，建立动态电离模式切换程序(ESI+ 5500V/ESI- 4500V)，并通过碰撞能量梯度优化使检测限降至1.5 μg/kg。

4.1 样品前处理优化
通过系统比较七种提取溶剂和七种SPE柱组合，确定OXY/NIC在肝脏基质中采用乙腈-丙酮(6:4)提取回收率最佳(106.45%)，而LEV/MED在脂肪组织中选用乙酸乙酯提取结合MCX柱净化可获得101.65%回收率，显著优于传统方法。

4.2 UPLC-MS/MS条件优化
MaxPeak高性能表面技术的色谱柱有效解决了OXY/NIC在常规C₁₈柱上的残留问题，0.1%甲酸-10 mM甲酸铵流动相使LEV的定量离子对(m/z 205.1>123.0)灵敏度提升38%。

4.3 方法验证
在2.5-1250 μg/kg线性范围内，所有分析物r²>0.995，肝组织加标回收率84.13-106.45%，日内/日间精密度RSD<12.55%，满足ICH Q2(R1)验证要求。

4.4 休药期确立
基于WTM1.4软件的一级消除动力学模型计算显示，OXY在脂肪组织的休药期最长(24.82天)，而LEV在肌肉组织需27.86天，最终建议采用28天的统一休药期以确保符合欧盟和中国MRL标准。

这项研究通过建立组织特异的残留消除模型，首次系统阐明了OXY/LEV在牛体内的药代动力学差异：OXY因亲脂性在脂肪组织半衰期延长，而LEV通过CYP450代谢快速清除。所开发的双SPE-UPLC-MS/MS方法将分析通量提高62%，为监管部门实施"同一健康"战略提供了关键技术支撑。特别值得注意的是，研究提出的极性梯度×混合模式SPE前处理框架，为其他多类别兽药残留检测建立了可推广的方法学范式，对推动兽药使用减量化行动和保障动物源性食品安全具有重要实践价值。