新型含氰基虎皮楠生物碱的发现及其抗肠道病毒71型活性研究

针对手足口病主要病原体EV71缺乏高效低毒药物的现状，研究人员从药用植物牛耳枫中分离获得3种新型含氰基虎皮楠生物碱（1-3）和1种达芙曼啶G型生物碱（4），其中化合物3和4对EV71的EC50值分别为3.78±0.23和6.87±0.30 μg/mL，显著优于利巴韦林（65.77±0.11 μg/mL），为抗EV71药物研发提供了新候选。

　　

肠道病毒71型(EV71)作为手足口病(HFMD)的主要病原体，常引发婴幼儿严重神经系统并发症甚至死亡。当前临床使用的利巴韦林等抗病毒药物存在疗效有限、毒副作用大等问题，尤其不利于婴幼儿健康发育。天然产物因其结构多样性和低毒性，成为抗病毒药物研发的重要来源。中山大学的研究团队从传统药用植物牛耳枫(Daphniphyllum calycinum Benth.)中取得突破性发现。

研究人员采用硅胶柱层析、半制备HPLC等分离技术，结合X射线单晶衍射和TDDFT-ECD计算，从牛耳枫茎叶中鉴定出7个生物碱，包括3个含氰基新型虎皮楠生物碱cyanodaphcalycines A-C(1-3)和1个新型daphmanidin G(4)。这些化合物具有罕见的5/6/6/7/5/5六环骨架结构，其中化合物1的绝对构型通过单晶衍射确认为5S,6R,7R,8S,9S,14S,20S。

在抗EV71活性评价中，研究人员使用人恶性胚胎横纹肌肉瘤(RD)细胞模型，发现含氰基的化合物3和达芙曼啶型化合物4表现出显著抑制活性，EC₅₀值分别为3.78±0.23和6.87±0.30 μg/mL，优于阳性对照利巴韦林(65.77±0.11 μg/mL)。尤其值得注意的是，化合物3的氰基取代可能通过增强与病毒靶点相互作用提升活性。

该研究首次报道了虎皮楠生物碱的抗EV71活性，不仅丰富了含氰基天然产物的结构类型，更重要的是为开发新型抗EV71药物提供了先导化合物。相关成果发表在《Phytochemistry》上，为应对婴幼儿手足口病这一重大公共卫生问题提供了新的解决方案。

主要技术方法包括：1)多种色谱技术分离纯化；2)综合运用NMR、MS、X射线衍射和TDDFT-ECD计算进行结构解析；3)采用RD细胞模型评估抗EV71活性。

研究结果具体表现为：

1. 结构解析：通过600 MHz NMR获得详细结构信息，化合物1的X射线衍射显示其晶系为单斜晶系P2₁空间群。
2. 绝对构型确定：采用TDDFT-ECD计算与实验ECD谱比对，准确指认了手性中心构型。
3. 生物活性：构效关系分析表明，氰基取代和特定骨架类型对增强抗EV71活性具有关键作用。

结论部分强调，该研究不仅首次揭示了虎皮楠生物碱抗EV71的潜力，其发现的含氰基新颖结构更为药物化学家提供了重要的结构模板。鉴于EV71在亚太地区的高流行性，这些发现对开发新一代抗病毒药物具有重要战略意义。