重组减毒鼠伤寒沙门氏菌表达钩端螺旋体嵌合抗原：一种抗钩端螺旋体病疫苗的免疫原性研究

本研究针对钩端螺旋体病疫苗开发难题，利用减毒鼠伤寒沙门氏菌（S. Typhimurium LVR01）表达钩端螺旋体嵌合抗原rQ1（含LipL32/LemA/LigA基因），通过口服（OR）和肌注（IM）途径免疫仓鼠。结果显示，IM组诱导了显著升高的IgG（P<0.0001）和IgG2（P<0.05）抗体，但未能提供同源攻击保护。该研究为活载体疫苗设计提供了新思路，发表于《Research in Veterinary Science》。

　　

钩端螺旋体病是由致病性钩端螺旋体（Leptospira）引起的人畜共患病，每年导致全球数百万人感染。当前疫苗主要依赖全细胞灭活制剂，但存在免疫持续时间短、血清型特异性保护等局限。尽管重组亚单位疫苗和减毒钩端螺旋体疫苗取得进展，但生产成本高、储存稳定性差等问题制约其应用。如何开发兼具广谱保护性和经济性的新型疫苗，成为该领域的关键挑战。

针对这一难题，巴西佩洛塔斯联邦大学（UFPel）的研究团队创新性地利用减毒鼠伤寒沙门氏菌（S. Typhimurium LVR01）作为载体，表达包含LipL32（外膜脂蛋白）、LemA（反向疫苗学鉴定的假设蛋白）和LigA（免疫球蛋白样蛋白）的嵌合抗原rQ1，构建了重组疫苗pTECH2/rQ1。这项研究发表于《Research in Veterinary Science》，系统评估了该疫苗的免疫原性和保护效力。

研究采用三项关键技术：1）分子克隆技术构建pTECH2/rQ1重组质粒；2）使用仓鼠模型比较口服与肌注免疫途径；3）间接ELISA检测血清IgG及其亚型。Western blot验证了TetC-rQ1融合蛋白在沙门氏菌中的表达，免疫组化分析揭示了抗原递呈特征。

【Ethics statement】实验通过UFPel动物伦理委员会审批（CEEA N° 003391/2023-77），符合巴西国家动物实验控制委员会（CONCEA）标准。

【Strains and growing conditions】选用缺失aroC基因的减毒鼠伤寒沙门氏菌LVR01株，在含卡那霉素的LB培养基中培养，确保生物安全性。

【In vitro expression of recombinant Q1 protein in Salmonella】Western blot证实pTECH2/rQ1成功表达2082 bp的嵌合抗原，抗TetC血清检测显示预期大小的融合蛋白条带。

【Discussion】肌注免疫诱导了显著高于对照组（PBS和空载体）的IgG抗体（P<0.0001），IgG2亚型优势（P<0.05）提示Th1型免疫应答。但攻毒实验显示，该疫苗未能提供针对同源钩端螺旋体的保护，可能与抗原表位遮蔽或细胞免疫激活不足有关。

【Conclusions】研究表明，尽管重组沙门氏菌疫苗能激发体液免疫，但其保护效力仍需优化。未来应重点评估剂量效应、抗原递呈效率及黏膜免疫应答机制。该工作为开发多价钩端螺旋体疫苗提供了重要技术参考，特别是嵌合抗原设计与活载体系统的联合应用策略。