基于弱分配色谱与紫外过程分析技术的AAV8型载体制造工艺强化研究

随着AAV上游滴度突破1×1012 vg/mL，传统线性梯度阴离子交换色谱(AEX)面临载量瓶颈。研究人员创新采用弱分配模式结合等度洗脱策略，在CIM QA整体柱上实现AAV8空壳/完整衣壳高效分离。该技术使载量提升10倍至>1×1015 cp/mL，完整衣壳纯度>80%，基因组得率>80%，为高滴度AAV的GMP生产提供新一代解决方案。

　　

在基因治疗领域，重组腺相关病毒(rAAV)载体生产中空壳与完整衣壳的分离是关键挑战。传统阴离子交换色谱(AEX)依赖线性电导梯度分离，但由于完整衣壳(含基因组)与空衣壳表面电荷差异微小，该方法在载量超过2×10¹³-2×10¹⁴ cp/mL整体柱体积时分离效率急剧下降。

研究团队另辟蹊径，采用弱分配色谱(WPC)结合等度洗脱的创新策略。通过精确优化上样条件并引入紫外过程分析技术(PAT)，成功在工业级CIM QA整体柱上实现突破：
1）利用流动相直接去除90%空衣壳
2）超载上样减少非特异性结合
3）等度洗避兔传统峰切割损失

该技术使载量飙升至>1×10¹⁵ cp/mL，单次操作时间缩短90%。机制研究表明，三重效应协同作用：流动相预纯化、空间位阻抑制杂吸附、等度洗脱保护产物完整性。最终获得完整衣壳纯度>80%且基因组回收率>80%的优异性能，为应对上游1×10¹² vg/mL高滴度挑战提供可放大的生产方案，特别适合连续生产工艺开发。