合成齐墩果酸衍生物RTA-408通过诱导凋亡和G1期细胞周期阻滞克服胶质母细胞瘤TMZ耐药性研究

本研究针对胶质母细胞瘤(GBM)对替莫唑胺(TMZ)耐药的临床难题，通过建立TMZ耐药细胞模型(GBM841R/U-87MGR)，首次系统阐明了RTA-408(Omaveloxolone)通过调控Nrf2-Keap1-ARE通路、抑制NF-κB活性并激活caspase-3依赖性凋亡，显著抑制耐药细胞增殖并逆转TMZ耐药性的分子机制，为GBM二线治疗提供了新型候选药物。

　　

胶质母细胞瘤(GBM)作为最具侵袭性的原发性脑肿瘤，其治疗始终面临"复发-耐药"的恶性循环。尽管替莫唑胺(TMZ)联合放疗的Stupp方案已成为标准疗法，但肿瘤异质性和DNA修复机制激活导致的TMZ耐药问题日益突出。当MGMT(06-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶)高表达时，会修复TMZ造成的DNA损伤；而核苷酸切除修复(NER)、碱基切除修复(BER)和错配修复(MMR)系统的激活更使耐药机制复杂化。面对这一临床困境，高雄医学大学的研究团队将目光投向具有多靶点调控特性的合成三萜类化合物RTA-408。

这项发表在《Medical Oncology》的研究创新性地构建了两种TMZ耐药细胞系(GBM841R和U-87MGR)，通过细胞活力检测、克隆形成实验、流式细胞术、ROS检测等关键技术，结合RNA测序(NGS)和蛋白质印迹分析，系统评估了RTA-408对耐药细胞的抑制作用及其分子机制。研究特别关注了Nrf2-Keap1-ARE信号通路、凋亡相关蛋白表达及细胞周期分布等关键指标。

研究结果显示，RTA-408在600-1000 nM浓度范围内呈现剂量依赖性抑制效果：

1. 细胞活力与克隆形成能力方面，PrestoBlue检测显示RTA-408处理24-72小时后，TMZ耐药细胞的存活率显著降低(P<0.0001)，克隆形成实验证实其抑制率可达70%以上。3D断层显微镜观察到明显的细胞形态改变和死亡增加。

1. 细胞周期调控方面，流式细胞术分析揭示RTA-408使G1期细胞比例增加15-20%(P<0.005)，同时G2/M期细胞减少。Western blot显示周期抑制蛋白p21 Waf1/Cip1表达上调，证实其通过Akt/PKB-mTOR-p21通路诱导G1期阻滞。

2. 凋亡机制方面，Annexin V-FITC/PI双染检测到早期凋亡细胞增加3-5倍(P<0.0001)。Caspase-3活性检测显示酶活性提升2.5倍，伴随促凋亡蛋白Bax上调和抗凋亡蛋白Bcl-2下调，表明通过线粒体途径激活凋亡。

1. 氧化应激调控方面，DCFH-DA检测显示ROS水平降低40-60%。NGS分析发现RTA-408显著上调Nrf2-Keap1-ARE下游基因(HO-1、NQO1等)，同时抑制NF-κB信号，形成独特的"双通路调控"模式。

这项研究的重要意义在于：首次证实RTA-408能通过多靶点协同作用克服GBM的TMZ耐药性。其独特之处在于同时激活抗氧化通路(Nrf2-Keap1-ARE)和促凋亡通路(caspase-3/Bax)，这种"双刃剑"机制既减轻了氧化应激又促进细胞死亡。研究为GBM的二线治疗提供了具有血脑屏障穿透能力的新选择，也为开发基于三萜类化合物的联合疗法奠定了理论基础。未来研究可进一步探索RTA-408与TMZ的协同效应及其在动物模型中的疗效，推动其向临床转化。