欧洲野牛(Bison bonasus)中的锥虫科寄生虫：从蠓媒筛查到组织检测的新见解

本研究针对波兰欧洲野牛(Bison bonasus)疑似利什曼病(Leishmania spp.)感染问题，通过分子检测方法系统筛查了比奥维耶扎森林地区的蠓媒(Culicoides)和63头野牛组织样本。研究发现蠓媒携带Trypanosoma theileri和Herpetomonas ztiplika，并在3头野牛中首次分子确认T. theileri感染，但未检出利什曼原虫DNA，提示此前血清学阳性可能源于交叉反应。该研究为野生动物寄生虫病诊断提供了重要参考依据。

　　

在野生动物保护领域，欧洲野牛(Bison bonasus)作为近危物种正面临新的健康挑战。近年来，波兰地区欧洲野牛的血清学检测曾提示可能存在利什曼病(Leishmania spp.)感染，这一发现令人困惑——因为波兰既非利什曼病流行区，也缺乏传统媒介白蛉(Phlebotomus)的分布。更蹊跷的是，此前研究在比奥维耶扎森林和格但斯克动物园发现的4例血清阳性野牛，其抗体滴度均处于临界值，这究竟是真感染还是检测假阳性？这个谜团直接关系到这一珍稀物种的疾病防控策略制定。

来自捷克查理大学理学院寄生虫学系(Department of Parasitology, Faculty of Science, Charles University, Prague, Czechia)的研究团队联合波兰华沙生命科学大学的多学科专家，开展了一项系统的病原筛查研究。他们采用分子生物学方法，双管齐下地检测了可能作为替代媒介的蠓虫(Culicoides)和野牛组织中的寄生虫DNA，相关成果发表在《European Journal of Wildlife Research》上。

研究人员主要采用了三种关键技术：一是通过CDC光诱捕器采集蠓媒并进行形态学和COI基因条形码鉴定；二是采用HSP70基因特异性PCR和更敏感的SSU rRNA巢式PCR检测利什曼原虫；三是对欧洲野牛的112份脾脏、6份肝脏和15份皮肤样本进行系统筛查。样本覆盖波兰五个地区的63头个体，包括比奥维耶扎森林、别什恰迪山脉等主要栖息地。

蠓媒鉴定与锥虫科检测结果

在比奥维耶扎森林五个地点捕获的263只蠓虫中，Culicoides obsoletus复合体(占59.3%)和C. pictipennis(36.5%)为优势种。对129只血餐、孕卵和经产雌蠓的检测显示，虽然所有样本均未检出利什曼原虫DNA，但意外发现：

• 4个C. obsoletus池携带Herpetomonas ztiplika

• 1个C. furcillatus、1个C. obsoletus和2个C. pictipennis池携带Trypanosoma theileri

  这一结果首次证实蠓虫可作为T. theileri的潜在载体。

欧洲野牛组织检测结果

对63头野牛的组织筛查显示：

• 所有样本的利什曼原虫HSP70 PCR检测均为阴性

• 敏感度更高的巢式PCR在3头来自别什恰迪山脉的野牛脾脏中检出T. theileri（亚型TthI）

  这是该寄生虫在欧洲野牛中的首次分子水平确认，GenBank登录号PV759752与既往未公开的野牛源序列(KF765799、KJ397592)共同证实了该宿主-寄生虫关系。

讨论与意义

这项研究通过严谨的分子检测得出了三个重要结论：首先，推翻了此前血清学提示的欧洲野牛利什曼病感染假说，认为临界阳性结果更可能源于T. theileri的血清交叉反应；其次，首次在分子水平确认了T. theileri可感染欧洲野牛，扩展了对该寄生虫宿主范围的认识；最后，发现蠓虫携带T. theileri和H. ztiplika，为理解这些寄生虫的传播生态提供了新线索。

该研究的保护生物学意义尤为突出：一方面消除了对欧洲野牛群体存在利什曼病的误判担忧，另一方面提示需要关注T. theileri等原生动物寄生虫在野生动物中的真实流行状况。研究方法也值得借鉴——当血清学结果存疑时，采用多基因位点的分子检测能有效辨别真假阳性，这对野生动物疾病监测具有示范价值。

值得注意的是，虽然本研究未发现利什曼原虫，但不能完全排除蠓虫作为Mundinia亚属利什曼原虫潜在媒介的可能性，特别是在中欧地区已出现L. martiniquensis感染的情况下。作者建议扩大采样范围和检测手段，持续监测这一珍稀物种的寄生虫感染动态，为欧洲野牛的科学保护提供更全面的病原学依据。