中药单体粉防己碱靶向IHNV磷蛋白Asp-81位点抑制病毒复制的机制研究

本研究针对鲑鱼传染性造血器官坏死病毒(IHNV)缺乏有效治疗药物的现状，通过筛选618种中药成分库，发现粉防己碱(tetrandrine)具有显著抗病毒活性(IC50=0.3274?μM)。研究证实该化合物通过靶向病毒磷蛋白(P protein)关键位点Asp-81阻断RNA复制阶段，口服5?mg/kg剂量可显著提高虹鳟鱼存活率，为水产抗病毒药物开发提供新策略。

　　

鲑鱼养殖业正面临传染性造血器官坏死病毒(IHNV)的严重威胁，这种能造成鱼苗90%死亡率的病原已肆虐全球70年。虽然DNA疫苗已获批使用，但注射给药方式操作困难，而RNA疫苗效果不佳、亚单位疫苗尚处预测阶段。更严峻的是，目前全球尚无商业化治疗药物，养殖户只能依赖生物安全措施被动防御。中国自1985年首次爆发疫情损失30万尾虹鳟鱼苗后，该病毒至今仍是水产养殖业的重大隐患。

中国水产科学研究院黑龙江水产研究所的研究团队从618种中药成分库中筛选出粉防己碱(tetrandrine)，发现其能有效抑制IHNV复制。通过分子对接预测该化合物靶向病毒磷蛋白(P protein)的Asp-81位点，并利用反向遗传学技术证实该位点对病毒存活的关键作用。体外实验显示1?μM浓度即可显著降低三种IHNV毒株(Sn1203、LN15、BLK-94)的mRNA表达和病毒滴度，体内口服5?mg/kg剂量使虹鳟鱼存活率显著提升。这项发表于《Applied Soil Ecology》的研究，为开发首个水产用抗IHNV口服药物奠定了理论基础。

研究采用高通量筛选、细胞毒性检测(CC₅₀)、半数抑制浓度(IC₅₀)测定、分子对接模拟、反向遗传学病毒拯救等关键技术。实验所用IHNV毒株来自流行病学调查和美国地质调查局的馈赠，虹鳟鱼实验遵循中国水产科学研究院动物实验规范。

【Cytotoxic and anti-IHNV effect of tetrandrine】

粉防己碱对EPC细胞的CC₅₀为2.962?μM，抗IHNV的IC₅₀达0.3274?μM。在MOI=10^?3感染条件下，1?μM处理组病毒mRNA表达量降低超过50%。

【Discussion】

相比已报道的莫努匹拉韦(molnupiravir)、蟾毒配基(bufalin)等抑制剂，粉防己碱具有更低的细胞毒性和明确的作用靶点。研究首次揭示Asp-81是IHNV磷蛋白与聚合酶蛋白(L protein)互作的关键位点，该位点单点突变即导致病毒无法拯救。

【Conclusion】

粉防己碱通过特异性结合P蛋白Asp-81阻碍病毒复制复合体形成，这种独特机制使其成为预防IHN的理想候选药物。研究不仅为水产抗病毒药物开发提供新思路，也为其他弹状病毒治疗策略研究提供了重要参考。团队后续将深入探究该化合物的广谱抗病毒潜力及其分子机制。