大豆顶芽和腋芽酵母双杂交cDNA文库的构建及SOC1a互作蛋白的筛选

　　摘要： 为研究大豆株型发育形成的分子机制，以大豆“Williams 82”为材料，分别取长短日照下不同发育时期植株的顶芽和腋芽，提取RNA后等量混合，采用Gateway方法构建酵母双杂交核系统cDNA文库，并对文库进行了转录本多样性分析。实验结果表明，构建的文库库容为1.2×107 CFU，插入片段重组率达100%且平均长度大于1000bp，包含29,170个基因，符合建库的标准，可用于后续酵母双杂交的筛选。以大豆开花期和株型重要调控因子SOC1a为诱饵，构建pGBKT7-SOC1a诱饵蛋白表达载体，经毒性和自激活活性检测后，利用构建的大豆顶芽和腋芽cDNA文库进行筛选，共获得32个阳性克隆。进一步通过DNA测序及BLAST比对和功能注释分析，得到14个与SOC1a互作的候选蛋白。其中，克隆了5个候选蛋白，并将其编码基因构建到pGADT7载体上，然后分别与pGBKT7-SOC1a进行一对一的回转验证，实验结果显示其中2个候选蛋白与SOC1a发生互作。进一步通过免疫共沉淀和荧光素酶互补实验证明了SEP2蛋白和SOC1a蛋白的互作关系。综上，本研究成功构建了大豆顶芽和腋芽酵母双杂交核系统cDNA文库，鉴定到的与SOC1a互作的蛋白将为从分子水平探究SOC1a调控大豆株型发育的机制提供理论基础。