基于沃尔巴克氏体(Wolbachia)监测技术在美国发现罗阿丝虫(Dirofilaria repens)和曼森线虫(Mansonella llewellyni)的研究

这篇研究通过非特异性扩增沃尔巴克氏体(Wolbachia) 16S rRNA基因，系统筛查了39,526份动物样本，首次在美国境内发现人兽共患寄生虫罗阿丝虫(D. repens)和野生动物曼森线虫(M. llewellyni)。研究创新性地利用沃尔巴克氏体与丝虫的共生关系，建立了新型分子监测体系，为跨境寄生虫传播风险预警和热带病防控提供了重要技术支撑。

　　

1. 引言
哺乳动物中，沃尔巴克氏体(Wolbachia)作为丝虫的必需共生菌，其检测可辅助诊断丝虫感染。这项研究创新性地利用沃尔巴克氏体与埃立克体(Anaplasma)/埃希氏体(Ehrlichia)的16S rRNA基因同源性，通过qPCR技术对2017-2023年间39,526份动物血液样本进行筛查。重点监测了可能输入美国的"旧世界"寄生虫如罗阿丝虫(D. repens)，以及本土野生动物携带的曼森线虫(Mansonella spp.)。

2. 材料与方法
采用两步验证策略：先通过非特异性扩增沃尔巴克氏体16S基因初筛，再经28S丝虫基因、细胞色素氧化酶亚基1(cox1)、肌球蛋白重链(myoHC)和70kDa热休克蛋白(hsp70)测序确认。对浣熊(Procyon lotor)样本额外进行改良Knott氏试验(MKT)和显微形态学分析，测量微丝蚴长度(236-287μm)和最大直径(3.4-3.5μm)。

3. 结果
3.1 诊断筛查
在23个州和波多黎各检出60例阳性，包括57只家犬和3只浣熊。89.5%(51/57)犬样本检出犬心丝虫(D. immitis)相关沃尔巴克氏体，2%(1/57)检出罗阿丝虫(D. repens)关联菌株。浣熊样本中沃尔巴克氏体与曼森 ozzardi 菌株相似度达98.9%。

3.2 家犬研究
一例从斯洛伐克进口的犬只检出D. repens，经cox1基因测序确认(GenBank PV258722)。值得注意的是，8.8%(5/57)样本检出昆虫源沃尔巴克氏体，包括猫栉首蚤(C. felis)关联菌株。与SNAP 4Dx Plus抗原检测相比，沃尔巴克氏体qPCR特异性达100%，但灵敏度仅18%。

3.3 浣熊研究
前瞻性采样发现60%(3/5)浣熊携带曼森线虫。微丝蚴形态学特征与M. llewellyni完全吻合：无鞘膜、钝头、神经环位于体长21.7%处。三种分子标记(cox1/myoHC/hsp70)构建的系统发育树显示，该虫株与人类曼森线虫显著不同。

4. 讨论
研究首次证实M. llewellyni携带沃尔巴克氏体，填补了该寄生虫基因组数据的空白。发现输入性D. repens病例警示美国存在该人兽共患病定殖风险。沃尔巴克氏体监测技术展现出筛查非典型丝虫的独特优势，特别是对常规抗原检测不敏感的虫种。昆虫源沃尔巴克氏体在哺乳动物体内的检出机制仍需深入探究，可能涉及新型宿主-细菌互作关系。

该研究为热带病防控提供了重要启示：需建立基于分子技术的跨境寄生虫监测网络，重点关注野生动物宿主和输入性病例。未来研究应聚焦沃尔巴克氏体特异性基因靶点(如ftsZ)的开发，以提高早期诊断灵敏度。