综述：过度依赖疟原虫18S rRNA基因进行疟疾分子诊断——系统综述的启示

这篇综述揭示了疟疾分子诊断领域长期过度依赖18S rRNA单靶点的潜在风险，通过系统分析1993-2025年76项研究，发现93%的PCR检测仍采用1993年Snounou团队开发的巢式PCR方法（nested PCR）。作者呼吁需验证多拷贝靶点（如varATS、Pfr364等）以提升低密度感染（LDI，<100寄生虫/μL）检测灵敏度，避免重蹈PfHRP2缺失导致RDT假阴性的覆辙。

　　

背景

全球疟疾负担虽显著下降，但非洲地区仍面临严峻挑战。当前诊断工具包括显微镜（金标准，检测限10-100寄生虫/μL）、快速诊断试纸（RDT，~200寄生虫/μL）和核酸扩增技术（NAAT，如PCR和LAMP）。其中PCR凭借超高灵敏度（<5寄生虫/μL）成为检测低密度和亚显微感染的关键手段，但其性能高度依赖靶基因选择。

方法学依赖性问题

系统分析显示，93%的研究采用18S rRNA基因作为PCR靶点，其中68%使用巢式PCR。值得注意的是，85%的研究直接沿用1993年Snounou设计的引物，而7%的尝试多路复用（multiplexing）可能导致检测限下降。这种单一靶点的长期依赖存在进化风险——类似PfHRP2基因缺失已导致RDT假阴性，18S rRNA靶点突变也可能引发漏诊，尤其在越南已发现P. ovale因靶序列变异导致的漏检案例。

新兴替代靶点探索

研究团队梳理了多种高拷贝数替代靶点：

• varATS（59拷贝/基因组）：qPCR检测限达0.06-0.15寄生虫/μL，较18S rRNA灵敏度提升10倍
• 线粒体基因（coxI/III，20-150拷贝）：但存在与人源DNA交叉反应风险
• 非编码序列（Pfr364：41拷贝；Pvr47：14拷贝）：在混合感染中表现优于18S rRNA
• 多拷贝短片段（MLS152：44拷贝）：SYBR Green qPCR实现0.1寄生虫/μL检测限

挑战与展望

尽管新靶点展现潜力，其临床应用仍受限于：

1. 部分靶点种属特异性不足（如cytb基因与人类/其他疟原虫交叉反应）
2. 实验室与临床样本检测性能差异（如Pfr364在人工混合样本中灵敏度更高）
3. 缺乏标准化比较体系

未来需重点验证多靶点联用策略，平衡成本效益与检测效能，为消除疟疾提供更可靠的分子诊断方案。