CacyBP/SIP与RPL6互作调控核糖体功能：揭示蛋白质合成新机制

本研究针对CacyBP/SIP蛋白在核糖体功能调控中的未知作用，通过质谱分析发现其与核糖体蛋白L6（RPL6）的直接互作，结合分子对接和细胞实验证实该互作通过C端结构域介导，并影响热休克蛋白Hsp70的表达。研究为理解蛋白质翻译调控提供了新靶点，对肿瘤及神经退行性疾病机制研究具有重要意义。

　　

在细胞生命活动中，蛋白质合成是维持生命活动的核心过程，而核糖体作为蛋白质合成的分子机器，其功能调控机制一直是生命科学领域的研究热点。近年来，科学家们发现多种辅助蛋白通过调控核糖体功能参与细胞应激、增殖和分化等过程，但具体分子机制仍有大量未知。其中，钙周期素结合蛋白/七在侏儒症1相互作用蛋白（CacyBP/SIP）作为一种多功能支架蛋白，虽已被证实与微管蛋白、S100蛋白家族成员等多种蛋白相互作用，但其是否参与核糖体功能调控仍是一个悬而未决的问题。

波兰科学院实验生物学研究所（Nencki Institute of Experimental Biology, Polish Academy of Sciences）的研究团队在《Amino Acids》发表的最新研究中，首次揭示了CacyBP/SIP通过直接结合核糖体蛋白L6（RPL6）调控蛋白质合成的分子机制。研究人员采用免疫共沉淀联合质谱分析技术筛选出RPL6等核糖体蛋白作为CacyBP/SIP的潜在互作伙伴，随后通过ELISA、邻近连接实验（PLA）和分子对接等技术证实两者直接互作的关键结构域。进一步研究发现，在CacyBP/SIP表达量降低的神经母细胞瘤NB2a细胞中，新生多肽标记物O-propargyl-puromycin（OPP）的掺入效率显著降低，且内质网网络结构发生改变，提示CacyBP/SIP可能通过影响核糖体功能参与蛋白质合成调控。

关键技术方法包括：1）质谱分析鉴定CacyBP/SIP互作蛋白；2）分子对接和分子动力学模拟预测互作界面；3）免疫共沉淀和PLA验证体内互作；4）OPP标记检测蛋白质合成效率；5）热休克诱导Hsp70表达分析。

【CacyBP/SIP与RPL6互作的验证】
通过免疫共沉淀从过表达CacyBP/SIP-3xFLAG的NB2a细胞中检测到内源性RPL6的共沉淀（图1A），ELISA实验显示重组CacyBP/SIP与RPL6直接结合（图1B）。分子对接发现CacyBP/SIP的C端结构域（残基186-229）与RPL6的C端结构域（残基148-283）形成疏水簇（图2B），分子动力学模拟进一步证实该互作在生理条件下的稳定性（图3）。

【核糖体定位与功能分析】
蔗糖密度梯度离心显示CacyBP/SIP与RPL6共同存在于60S大亚基组分中（图6）。在CacyBP/SIP敲降细胞中，OPP标记显示蛋白质合成活性降低（图7C-D），内质网追踪染色强度下降约60%（图S4），且热休克诱导的Hsp70表达增幅显著低于对照组（图8），表明CacyBP/SIP可能通过维持核糖体功能影响应激反应。

这项研究首次系统阐明了CacyBP/SIP-RPL6互作的结构基础及其对核糖体功能的调控作用，为理解蛋白质合成的精细调控提供了新视角。特别值得注意的是，CacyBP/SIP在多种肿瘤中异常高表达，而RPL6参与DNA损伤响应和p53通路调控，该互作网络的发现为相关疾病的治疗靶点开发奠定了理论基础。此外，研究建立的分子对接与功能验证相结合的策略，为其他支架蛋白的功能研究提供了方法学参考。未来需要进一步探究CacyBP/SIP是否通过类似机制调控其他核糖体蛋白，以及该通路在特定病理条件下的变化规律。