革兰阴性菌源胶原酶KU665299的优化表征及其体外高效溶栓应用研究

来自印度的研究人员通过响应面法(RSM)优化了污染金黄杆菌(Chryseobacterium contaminans) KU665299产胶原酶的发酵条件，获得比活达538.0 U/mg的32 kDa胶原酶。该酶在pH7.5/40℃条件下对胶原特异性最强(Km 0.059 mg/l，Vmax 588.24 μmol/min/mg)，Zn2+/Ca2+可增强活性，40分钟即可完全消化1ml血凝块，展现显著溶栓潜力。

　　

这项突破性研究聚焦于革兰阴性菌Chryseobacterium contaminans KU665299分泌的胶原酶。科研团队采用响应面法(Response Surface Methodology, RSM)对液态发酵条件进行系统优化，使胶原酶产量提升1.2倍。通过硫酸铵沉淀结合DEAE-Sepharose层析纯化后，酶比活性飙升至538.0 U/mg，纯化倍数达5.33倍。

电泳分析显示该酶分子量为32 kDa，在生理相容条件(pH 7.5，40℃)下表现最佳活性。深入动力学研究揭示其对胶原底物的高度特异性，测得米氏常数K_m为0.059 mg/l，最大反应速率V_max达588.24 μmol/min/mg。有趣的是，二价金属离子Zn²⁺和Ca²⁺能显著激活酶活，而EDTA和DTT则表现出强烈抑制作用。

最令人振奋的是，在模拟人体温度(37℃)条件下，纯化胶原酶展现出惊人的溶栓效率——仅需40分钟即可完全消化1毫升血凝块。这种高效、特异的胶原降解能力，为开发新型血栓治疗制剂提供了极具前景的酶制剂候选。该研究不仅实现了微生物源胶原酶的工艺优化，更开辟了酶法溶栓治疗的新思路。