RNAi介导的核受体敲除通过破坏几丁质代谢通路影响暗黑鳃金龟角质层形成

本研究针对昆虫Toll通路在dsRNA病毒免疫中的机制空白，通过qRT-PCR和体内外稳定性实验，首次揭示BmToll9-2可被注射型dsRNA显著激活（中肠表达峰值12.88倍），而口服途径因中肠快速降解失效，证实dsRNA作为新型PAMP通过血淋巴长效递送触发Toll通路，为RNAi害虫防治和抗病毒免疫提供新靶点。

　　

在昆虫与病原体长达4.8亿年的军备竞赛中，Toll通路作为先天免疫的核心防线，其抗细菌机制已被充分阐明，但对RNA病毒的防御机制仍存在认知鸿沟。尤其令人困惑的是，双链RNA（dsRNA）——这一病毒复制的标志性物质，能否像哺乳动物中那样被Toll样受体识别？这个问题对于RNA干扰（RNAi）害虫防治技术的优化至关重要，因为外源dsRNA既可能通过基因沉默杀灭害虫，也可能意外激活免疫系统导致防治失败。

广东省农业科学院的研究团队以家蚕（Bombyx mori）为模型，聚焦Toll家族成员BmToll9-2，在《Journal of Insect Physiology》发表的研究揭示了令人惊讶的发现。通过定量实时PCR（qRT-PCR）和dsRNA稳定性实验，研究人员首次证实注射的dsRNA能像传统病原相关分子模式（PAMP）一样激活BmToll9-2，而口服途径则因中肠液的快速降解（10分钟内完全分解）失效。更引人注目的是，家蚕细胞质多角体病毒（BmCPV）的感染同样触发了该受体表达，暗示Toll通路可能参与抗dsRNA病毒防御。

关键技术包括：1）采用T7启动子体外合成GFP-dsRNA；2）通过注射和饲喂两种途径递送dsRNA；3）qRT-PCR定量检测中肠、脂肪体和表皮组织BmToll9-2转录水平；4）体外模拟中肠液与血淋巴环境评估dsRNA稳定性；5）BmCPV病毒感染实验验证天然dsRNA病毒应答。

注射dsRNA诱导BmToll9-2转录
注射组中肠BmToll9-2表达在6小时达峰值（12.88倍），脂肪体响应延迟但持续（24小时仍保持7.41倍），而表皮呈现双峰特征。这种组织特异性动力学提示血淋巴可能是dsRNA长效递送的关键载体——实验证实dsRNA在血淋巴中可稳定存在6小时，远超中肠液的10分钟半衰期。

讨论与意义
该研究颠覆了传统认知：1）首次将dsRNA确立为昆虫Toll通路的潜在PAMP，其免疫激活严格依赖递送途径；2）揭示血淋巴作为"天然缓释系统"的关键作用，为RNAi农药剂型设计提供方向——规避中肠降解、延长血淋巴滞留或成增效策略；3）发现BmToll9-2对BmCPV的响应，为鳞翅目抗病毒免疫进化提供新证据。

值得注意的是，与哺乳类TLR3/MDA5不同，BmToll9-2可能通过非经典途径感知dsRNA，其胞内TIR结构域可能招募MyD88适配蛋白，进而激活NF-κB样通路。这种机制既能解释为何口服RNAi在鳞翅目中效率低下，又暗示通过工程化改造dsRNA稳定性可同时增强基因沉默和免疫激活的双重效应。该研究为害虫防治和抗病毒育种提供了双重理论支撑。