基于EUCAST标准的特比萘芬和伊曲康唑敏感性琼脂筛选法在多中心评估中对毛癣菌属的检测效能验证

本研究针对全球日益严重的毛癣菌属(Trichophyton spp.)耐药问题，创新性地采用基于EUCAST E.Def 10.2标准的4孔琼脂筛选法，在5个中心对42株特比萘芬野生型(WT)/非野生型(non-WT)菌株进行检测。结果显示该方法对特比萘芬non-WT菌株检测灵敏度达94%-100%，特异性100%，且能准确识别伊曲康唑WT菌株，为临床实验室提供了一种简便可靠的耐药筛查方案。

　　

近年来，皮肤癣菌感染的治疗正面临严峻挑战。曾经罕见的抗真菌药物耐药现象，自2010-2020年间在全球范围内呈现爆发式增长，特别是由毛癣菌属(Trichophyton)引发的感染病例。其中，特比萘芬耐药在印度毛癣菌(T. indotineae)和红色毛癣菌(T. rubrum)中尤为突出，部分地区耐药率高达71%。更令人担忧的是，部分菌株同时对唑类药物产生交叉耐药，使得传统治疗方案面临失效风险。这种耐药性的产生与角鲨烯环氧化酶(SQLE)基因的热点突变密切相关，但现有检测方法操作复杂，难以在普通临床实验室推广。

针对这一临床困境，来自欧洲多国的研究人员开展了一项开创性研究。他们基于欧盟药敏试验委员会(EUCAST)标准，开发了一种简化的4孔琼脂筛选法，旨在快速鉴别特比萘芬耐药菌株。这项多中心评估研究在希腊、丹麦、芬兰、荷兰和西班牙五个实验室同步进行，采用双盲设计对42株经分子鉴定的毛癣菌属菌株进行检测，其中包括17株特比萘芬non-WT菌株和25株WT菌株。

研究团队采用的核心技术包括：1) EUCAST E.Def 10.2标准改良的琼脂筛选法，使用含特比萘芬(0.016/0.125 mg/L)和伊曲康唑(1 mg/L)的4孔板；2) 分子生物学方法确认菌株SQLE基因突变状态；3) 多中心标准化操作流程，所有菌株在25-28°C培养5-7天，通过目测生长情况判断耐药性。

【结果】部分显示：
Objectives：研究证实毛癣菌属耐药已成为全球公共卫生问题，迫切需要建立简便可靠的检测方法。
Methods：采用包含特比萘芬两个浓度梯度和伊曲康唑的4孔板，接种42株经分子鉴定的菌株（17株non-WT，25株WT），在多中心进行标准化测试。
Results：5天培养后多数菌株生长良好，6-10株需延长至7天。所有中心对伊曲康唑WT菌株判断准确率达100%，特比萘芬non-WT检测灵敏度94%-100%（95%CI 79%-100%），特异性100%。值得注意的是，1株T. rubrum强突变株在1个中心出现假阴性，而WT型T. indotineae能在0.016 mg/L特比萘芬中生长。
Conclusions：多中心验证表明该方法能准确识别特比萘芬耐药株和伊曲康唑敏感株，具有优异的重复性和可靠性。

在讨论部分，作者强调该方法的三大优势：首先，操作简便性使其适合非专科实验室使用；其次，采用EUCAST最新制定的ECOFF值(0.03 mg/L)作为判读标准，保证了结果的前瞻性；最后，多中心验证证实其在不同地理区域的适用性。研究同时指出，对T. indotineae野生株在低浓度特比萘芬中的生长现象需要特别关注，建议结合临床疗效进行综合判断。

这项发表在《Clinical Microbiology Newsletter》的研究为临床抗真菌药物选择提供了重要决策工具。特别是在特比萘芬耐药日益普遍的背景下，该检测方法既能避免过度使用二线药物导致的新耐药产生，又能确保耐药患者及时获得有效治疗，对遏制全球皮肤癣菌耐药传播具有重要公共卫生意义。随着T. indotineae等耐药菌株的跨境传播，这种标准化检测方法的推广将有助于建立全球耐药监测网络，为制定区域性防治策略提供科学依据。