盐酸小檗碱通过调控IL6/STAT3通路抑制p53突变型胆囊癌细胞的增殖与转移

本研究针对恶性程度高、预后差的胆囊癌(GBC)开展治疗探索，发现传统中药黄连提取物盐酸小檗碱(BH)能显著抑制p53突变型GBC-SD细胞的增殖、迁移和侵袭。通过蛋白质芯片、WB等技术证实BH通过下调IL-6表达抑制STAT3磷酸化，激活caspase-3/8促凋亡通路，并在裸鼠模型中验证其抑瘤效果。该研究为GBC靶向治疗提供了新策略，发表于《Scientific Reports》。

　　

胆囊癌(GBC)作为胆道系统最常见的恶性肿瘤之一，全球发病率呈现显著地域差异，在发展中国家尤为高发。这种具有"沉默杀手"之称的癌症，由于早期症状隐匿且进展迅速，患者确诊时多已失去手术机会。更棘手的是，传统放化疗效果有限，而靶向治疗药物的研发又面临巨大挑战。尤其值得注意的是，p53基因突变在GBC中检出率高达50-70%，与肿瘤恶性进展和治疗抵抗密切相关。在这一背景下，源自传统中药黄连的活性成分——盐酸小檗碱(Berberine hydrochloride, BH)进入了研究视野。这种具有多重药理作用的生物碱，因其在胆汁中富集特性（给药48小时后胆汁回收率达22.8%），成为治疗胆道疾病的理想候选药物。

广州中医药大学附属临沂市人民医院的研究团队在《Scientific Reports》发表了一项突破性研究。他们发现BH能选择性抑制p53突变型GBC-SD细胞的恶性生物学行为，其机制与调控IL-6/STAT3信号通路密切相关。研究人员采用MTT法检测细胞活力、流式细胞术分析细胞周期和凋亡、Transwell实验评估迁移侵袭能力，并运用人类凋亡蛋白质组芯片和炎症因子芯片筛选关键靶点。在动物实验中，通过建立GBC-SD细胞肝移植瘤模型，采用超声监测评估BH的体内抑瘤效果。

Berberine hydrochloride抑制GBC细胞增殖
MTT实验显示BH对GBC-SD和NOZ细胞的IC₅₀分别为40.45 mg/L和61.67 mg/L（48小时），且对p53突变型GBC-SD细胞的抑制作用更为显著。平板克隆实验进一步证实，BH处理组GBC-SD细胞集落形成数从对照组的10.6±1.85个降至1.0±0.89个（p<0.001）。

Berberine hydrochloride引起细胞周期改变并促进凋亡
流式细胞术揭示BH诱导G2/M期和S期阻滞，同时使G1期细胞比例显著降低。更值得注意的是，BH处理使GBC-SD细胞凋亡率从8.07±0.54%飙升至43.85±7.30%（p<0.001），且通过激活caspase-8/caspase-3级联反应并抑制XIAP（凋亡抑制蛋白）表达来实现这一效应。

Berberine hydrochloride抑制GBC细胞侵袭转移
划痕实验显示BH处理24小时后，GBC-SD细胞迁移能力显著受限（p<0.01）。Transwell实验进一步证实，BH使GBC-SD细胞迁移和侵袭能力分别降至对照组的50.03±1.67%和52.53±3.48%（p<0.001）。免疫荧光染色观察到BH引起肌动蛋白骨架紊乱，应力纤维减少，从形态学上解释了其抗转移机制。

机制探究：靶向IL-6/STAT3通路
炎症因子芯片分析发现BH显著降低IL-6、IL-8和IL-11表达（p<0.01），其中IL-6下降最为明显。ELISA验证BH处理组IL-6浓度仅为对照组的32.5%。当外源添加IL-6（200 ng/ml）后，BH诱导的凋亡被部分逆转（p<0.05），迁移侵袭能力也明显恢复。Western blot显示BH处理组p-STAT3蛋白水平显著降低，证实其通过抑制IL-6/STAT3信号轴发挥作用。

体内实验验证抑瘤效果
在GBC-SD细胞肝移植瘤模型中，口服BH（50 mg/kg·d）治疗组的肿瘤体积较对照组显著缩小（p<0.01），超声监测显示肿瘤生长明显受抑。

这项研究系统阐明了BH通过IL-6/STAT3通路抑制p53突变型胆囊癌的多重机制：在分子层面下调IL-6表达，抑制STAT3磷酸化；在细胞层面阻滞周期、促进凋亡、破坏细胞骨架；在动物层面验证抑瘤效果。特别值得注意的是，BH对p53突变型细胞表现出更强抑制作用，这为精准治疗提供了新思路。研究不仅揭示了传统中药活性成分的现代药理机制，更发现了IL-6可作为GBC预后标志物和靶向治疗靶点。鉴于BH在胆汁中高浓度分布的特性，这项研究为开发胆道肿瘤局部给药方案奠定了重要基础，具有显著的临床转化价值。