靶向递送雷公藤甲素与CYP3A4-siRNA的仿生杂化纳米颗粒治疗肺转移性黑色素瘤的研究

为解决肺转移性黑色素瘤(PMM)临床治疗中耐药性高、药物代谢快的问题，研究人员开发了靶向仿生递送系统TP-siRC@tHyNPs，通过融合DR5-scFv修饰的外泌体(DR5-Exo)与共载雷公藤甲素(TP)和CYP3A4-siRNA的脂质体(TP-siRC@Lip)，实现协同抗肿瘤效应。该系统显著延长TP半衰期，增强靶向性和疗效，为PMM治疗提供新策略。

　　

肺转移性黑色素瘤(PMM)是一种侵袭性强、易转移的恶性肿瘤，5年生存率不足17%。当前临床面临三大难题：传统疗法响应率低、药物代谢酶CYP3A4导致活性成分快速清除、全身毒性显著。针对这些瓶颈，复旦大学附属肿瘤医院的研究团队在《SCIENCE ADVANCES》发表创新成果，开发出多功能仿生递送系统TP-siRC@tHyNPs，通过"一石三鸟"策略实现突破：靶向递送、代谢调控与协同治疗。

研究采用四大关键技术：1) 基因工程构建DR5-scFv修饰的293T细胞系，制备靶向外泌体DR5-Exo；2) 薄膜水化法制备共载TP与CYP3A4-siRNA的阳离子脂质体TP-siRC@Lip；3) 冻融法实现外泌体-脂质体膜融合构建杂化纳米系统；4) 建立患者来源异种移植(PDX)模型验证疗效。

【Construction and antitumor effect of DR5-scFv】
通过分子对接和慢病毒转染获得高亲和力DR5-scFv，动物实验显示其可诱导肿瘤细胞凋亡，抑制A375M移植瘤生长82.69±2.48%。

【Preparation and characterization of TP-siRC@tHyNPs】
杂化纳米颗粒直径约150nm，zeta电位-11mV，TP包封率达80.07±1.18%。pH响应释放特性使肿瘤微环境中药量提升79.46±4.14%。

【In vitro internalization and distribution】
CLSM证实DR5-scFv介导的内吞作用使TP-siRC@tHyNPs在A375M细胞的摄取量较非靶向组提高3.8倍，且主要通过小窝蛋白依赖途径入胞。

【Cytopharmacokinetics】
CYP3A4-siRNA将TP半衰期从1.71±0.45小时延长至5.08±0.51小时，AUC提升5.36±0.35倍。

【In vitro antitumor activity】
TP-siRC@tHyNPs使细胞凋亡率升至82.69±2.48%，迁移抑制率达21.78±3.16%，IC₅₀较游离TP降低6.7倍。

【Investigation of the antitumor mechanisms】
机制研究揭示三重作用：1) 通过calreticulin(CRT)暴露诱导免疫原性细胞死亡(ICD)；2) 将M2型巨噬细胞重编程为M1型；3) 阻断Chk1-Cdc25A通路致S期阻滞，同时激活caspase-8/9级联凋亡。

【In vivo biodistribution and pharmacokinetics】
药代动力学显示TP-siRC@tHyNPs使TP半衰期延长58倍，肺组织药物浓度是游离组的39.25倍。

【Anti-PMM effect in vivo】
在PDX模型中，TP-siRC@tHyNPs使肿瘤抑制率达91.00±3.83%，生存期延长2.3倍。免疫组化显示cleaved caspase-3表达提升4.8倍，Ki67阳性率降至9.03±1.53%。

该研究创新性地将外泌体的天然靶向性与脂质体的高载药量优势结合，首次实现TP与CYP3A4-siRNA的共递送。临床转化价值体现在：1) 通过代谢调控将TP治疗窗拓宽8.6倍；2) DR5-scFv的"导航-杀伤"双功能使靶向性与疗效同步提升；3) 仿生设计使静脉注射后肺蓄积量提高12.7倍，为转移性肿瘤治疗提供新范式。研究建立的"代谢酶沉默-靶向递送"协同策略，可拓展至其他易被CYP3A4代谢的抗癌药物开发。