基于NanoBiT技术的克里米亚-刚果出血热病毒NP和GP38抗体快速检测方法开发及多物种应用研究

为解决克里米亚-刚果出血热病毒(CCHFV)血清学检测中存在的物种依赖性和时效性问题，研究人员开发了基于NanoBiT技术的"混合读取"(MR)检测方法，靶向病毒核蛋白(NP)茎区和GP38糖蛋白。该研究证实GP38与NP联合检测可提高回顾性病例识别准确率，在人类和动物样本中均实现30分钟快速检测，灵敏度达95.2%，特异性超98.9%。这项技术为CCHFV跨物种监测提供了高效工具。

　　

克里米亚-刚果出血热病毒(CCHFV)作为致死率高达40%的人畜共患病原体，其监测面临两大挑战：传统血清学检测需要物种特异性试剂，且耗时长达数小时；而现有方法主要依赖核蛋白(NP)抗原，存在与相关病毒的交叉反应风险。美国疾病控制与预防中心(CDC)的研究团队在《eBioMedicine》发表创新成果，开发了基于分裂纳米荧光素酶(NanoBiT)技术的"混合读取"检测系统，通过同时靶向NP茎区和GP38抗原，实现了30分钟快速、跨物种的抗体检测。

研究采用三大关键技术：1）构建NP茎区和GP38与NanoBiT荧光素酶片段的融合蛋白生物传感器；2）建立包含714例急性期患者、21例恢复期患者及782例动物样本的多队列验证体系；3）通过ROC曲线分析确定检测阈值，并与商品化IDScreen? CCHF检测进行平行比较。

在"Development of biosensors to detect anti-NP and anti-GP38 antibodies"部分，研究发现NP茎区片段（NP2）比全长NP具有更好的抗体识别效率，而GP38生物传感器能识别所有测试物种的抗体。

"Validation and performance"数据显示，恢复期样本检测灵敏度达95.2%，NP和GP38特异性分别为98.9%和99.7%。急性期样本中，联合检测使D11-22时间段的灵敏度提升至86.5%。

"Antibody kinetics"揭示重症患者抗体信号强度显著高于轻/中症患者（p<0.05），且GP38抗体与NP抗体呈现互补检测模式。动物实验中，NP MR检测使绵羊样本阳性率从15.1%（IgG ELISA）提升至23.8%。

讨论部分强调，该研究首次系统证实GP38可作为CCHFV诊断的补充抗原，其与NP的联合检测能有效提高回顾性病例识别率。虽然NSD基因组成员间存在交叉反应，但该方法操作简便、通量高的特点，使其特别适合大规模监测。研究人员特别指出，未来可通过纳入更多样化的GP38序列进一步提升检测广度，为CCHFV的生态学和流行病学研究提供有力工具。