HIV Tat蛋白通过CDK9通路协同上调乙肝表面抗原表达：揭示HIV-HBV共感染加速肝病进展的新机制

【编辑推荐】本研究首次揭示HIV Tat蛋白通过激活CDK9/cyclin T2复合物，特异性上调乙肝病毒（HBV）表面抗原（HBsAg）的转录与胞内蓄积，阐明了HIV-HBV共感染者肝病加速进展的分子机制。该发现为开发Tat抑制剂等靶向干预策略提供了理论依据，对优化共感染临床管理具有重要意义。

　　

伪型HIV感染HBV表达肝细胞模型构建
采用VSV.G伪型HIV病毒（VSV.G-NL4-3-ΔEnv-EGFP）感染表达钠离子-牛磺胆酸共转运多肽（NTCP）的HepG2细胞系，建立HIV-HBV共感染模型。流式细胞术显示67.3%细胞呈现绿色荧光蛋白（GFP）表达，Alu-LTR定量证实每百万细胞中HIV整合拷贝数达650,228。整合酶抑制剂raltegravir可完全阻断该过程，证实模型有效性。

HIV感染显著提升HBsAg胞内蓄积
Western blot检测发现，共感染使肝细胞中乙肝表面抗原（HBsAg）的L/M亚型表达量增加2倍，而培养基上清中HBsAg未见显著变化。通过GFP⁺细胞分选实验排除了旁观者效应，证实该现象仅发生于HIV成功感染的细胞。有趣的是，使用携带荧光素酶报告基因的伪型病毒（VSV.G-NL4-3-ΔEnv-ΔVpr-Luc）同样重现该表型，排除了GFP本身的影响。

Tat特异性激活HBs mRNA转录
Northern blot与qPCR分析揭示，HIV感染使HBs mRNA水平提升2倍，而前基因组RNA（pgRNA）保持不变。通过质粒转染筛选发现，仅HIV Tat蛋白过表达可模拟该效应（P=0.015），其他病毒蛋白（Gag/Nef/Rev/Vpr/Vpu）均无此功能。脂质纳米颗粒递送Tat mRNA（Tat-LNP）实验进一步验证，Tat以剂量依赖性方式促进HBsAg表达，在TZM-bl报告系统中该机制得到交叉验证。

CDK9通路介导Tat的转录激活作用
机制研究表明，Tat通过招募正转录延伸因子b（P-TEFb）/CDK9复合物至HBV preS1/preS2启动子区域发挥作用。使用CDK9特异性抑制剂BAY-1251152（1 μM）处理16小时后，RNA聚合酶II Ser2磷酸化（RNA-Pol2-S2p）水平下降，伴随HBs mRNA表达回调至基线水平。这一发现将HIV与HBV的分子互作锚定在CDK9依赖的转录调控通路上。

临床转化与潜在干预策略
研究指出，当前HIV潜伏激活治疗策略可能因提升Tat水平而加剧共感染者肝损伤。动物实验已证实，可溶性Tat可通过旁分泌作用影响未感染肝细胞。这为开发Tat抑制剂（如didehydro-cortistatin A）提供了理论支持，尤其适用于接受抗逆转录病毒治疗（ART）后仍存在肝病进展的HIV-HBV共感染人群。

模型局限性与未来方向
尽管该研究采用NTCP-HepG2细胞模拟天然HBV感染，但相较于原代肝细胞仍存在转录组差异。作者建议后续采用3D肝类器官共培养系统，结合单细胞测序技术进一步验证。临床样本分析显示，肝组织中HIV感染率虽低（约0.1%），但Tat的跨细胞作用可能放大其病理效应，这将成为未来研究重点。