竹丛枝病病原菌Aciculosporium take的农杆菌介导遗传转化体系构建及应用研究

为解决竹丛枝病(WBD)病原菌Aciculosporium take缺乏遗传转化体系的问题，研究人员成功开发了农杆菌介导转化(ATMT)系统。通过构建pCAMBIA1300ura-EGFP-A-HYG-B载体，在1×107 CFU/ml孢子浓度、200 μM乙酰丁香酮等优化条件下实现转化，经PCR和荧光显微镜验证获得21个转化子/107孢子，为解析竹WBD致病机制奠定基础。

　　

竹丛枝病(Witches' broom disease, WBD)由稻槎菜刺盘孢(Aciculosporium take)引起，严重危害竹林生态。由于缺乏有效的遗传操作工具，该病原菌的致病机理研究长期受限。科研团队创新性地建立了农杆菌介导转化(Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation, ATMT)体系：精心设计的pCAMBIA1300ura-EGFP-A-HYG-B载体包含潮霉素(HYG)抗性基因、真菌特异性启动子PtrpC和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因。通过优化转化条件——使用AGL1菌株、孢子浓度1×10⁷ CFU/ml、200 μM乙酰丁香酮(acetosyringone)、pH5.4的IM诱导培养基及25°C三天培养，成功实现外源基因的稳定整合。转化效率达21个转化子/10⁷孢子，荧光显微观察显示EGFP稳定表达，PCR和遗传稳定性检测证实T-DNA区段成功插入基因组。该突破性工作不仅填补了A. take遗传操作的技术空白，更为解析其致病相关基因功能提供了关键研究工具，对竹类病害防控具有重要科学价值。