CD80增强型多功能T细胞衔接器TriTE-N13：前列腺癌免疫治疗新突破

针对前列腺癌免疫抑制微环境限制T细胞衔接器(TCEs)疗效的难题，第四军医大学团队创新性设计了一种融合CD80共刺激结构域的三特异性抗体TriTE-N13。该研究通过体外3D球体模型和免疫重建小鼠实验证实，TriTE-N13能显著增强T细胞活化(CD25/CD69表达提升60%)及肿瘤杀伤效率(80%最大杀伤率)，为晚期前列腺癌(mCRPC)提供了"靶向+共刺激"一体化治疗新策略。

　　

前列腺癌作为男性第二大高发恶性肿瘤，传统激素疗法对转移性去势抵抗性前列腺癌(mCRPC)的疗效已进入瓶颈期。尽管免疫检查点抑制剂在部分癌种中表现亮眼，但临床数据显示其对mCRPC患者客观缓解率不足5%。T细胞衔接器(T-cell engagers, TCEs)虽能通过同时靶向CD3和肿瘤抗原(如PSMA)引导T细胞攻击肿瘤，但实体瘤复杂的免疫抑制微环境常使T细胞陷入"耗竭"状态——这正是当前免疫治疗面临的核心困境。

第四军医大学西京医院泌尿外科团队独辟蹊径，从T细胞激活的双信号理论入手：现有PSMA/CD3双特异性抗体仅能提供TCR-CD3的"第一信号"，而缺乏CD28-CD80的"第二信号"。研究组通过生物信息学分析发现，前列腺癌组织中CD80表达显著低于肾癌等免疫治疗敏感肿瘤，这种共刺激分子的缺失可能是导致T细胞功能抑制的关键。基于此，团队创新性地将CD80胞外区与PSMA-CD3双特异性抗体融合，构建出全球首个靶向PSMA/CD3/CD80的三功能T细胞衔接器TriTE-N13。

研究采用多学科交叉技术路线：通过酵母展示文库筛选高亲和力scFv片段，采用基因编辑构建含CD80胞外区的融合蛋白；利用流式细胞术验证抗体与PSMA⁺细胞(KD=2.3 nM)和CD3⁺细胞(KD=1.4 nM)的结合特性；建立2D共培养和3D肿瘤球体模型评估T细胞活化(CD25/CD69)和细胞因子(IL-2/IFN-γ)释放；最后在PBMC重建的NCG小鼠模型中验证体内抗肿瘤效果。

抗体构建与表征

质谱分析证实TriTE-N13为120 kDa完整结构，差示扫描量热法(DSC)显示其熔解温度达68°C，显著优于传统双特异性抗体。独特的是，单独使用TriTE-N13即可激活20%的CD3⁺ T细胞，而对照抗体BiTE-N2几乎无此效应，证明CD80结构域具有自主激活潜力。

体外杀伤效应

在E:T=4:1的共培养体系中，7 nmol/L TriTE-N13对C4-2细胞的杀伤率达80%，较BiTE-N2提高35%。3D肿瘤球实验显示，TriTE-N13处理组球体体积缩小52%，远超BiTE-N2组的28%。值得注意的是，CD8⁺ T细胞表面活化标志物TIM-3和CD107a的表达提前24小时出现，揭示CD80可加速免疫突触成熟。

体内治疗效果

在肿瘤体积>100 mm³的免疫重建小鼠中，TriTE-N13组肿瘤抑制率持续保持85%，停药后仍维持疗效；而BiTE-N2组在治疗中断后迅速复发。组织荧光染色显示，TriTE-N13组肿瘤浸润CD8⁺ T细胞密度是对照组的3倍，且PD-1⁺细胞比例增加，提示其能逆转T细胞耗竭状态。

这项发表于《Cancer Immunology, Immunotherapy》的研究开创性地将共刺激分子整合到TCEs设计中，突破性地解决了两大难题：一是通过CD80的"顺式"作用阻断PD-L1/PD-1抑制信号，二是直接提供CD28共刺激信号。临床转化前景广阔，相较于需个性化制备的Sipuleucel-T疗法，TriTE-N13具有标准化生产优势；相比AMG160等临床阶段PSMA/CD3双抗，其针对大体积肿瘤的疗效提升显著。未来研究将聚焦CD80与CTLA-4的相互作用机制，以及优化给药方案以降低细胞因子风暴风险。