基于LC-MS/MS技术的九种新型靶向抗癌药物血浆浓度监测方法开发与验证

本研究针对非小细胞肺癌(NSCLC)等肿瘤治疗中九种新型靶向药物(adagrasib/sotorasib等)的个体化用药需求，开发了可同时检测血浆中9种药物的LC-MS/MS方法，验证范围覆盖10-50,000 ng/mL，稳定性数据支持临床样本运输存储，为治疗药物监测(TDM)和药代动力学研究提供关键技术支撑。

　　

近年来，随着精准医疗的发展，针对特定基因突变的靶向抗癌药物改变了非小细胞肺癌(NSCLC)等恶性肿瘤的治疗格局。KRASG12C抑制剂adagrasib和sotorasib、MET抑制剂capmatinib、ALK抑制剂ensartinib和lorlatinib，以及NTRK抑制剂entrectinib/larotrectinib、RET抑制剂pralsetinib/selpercatinib等九种新型口服靶向药物，虽然显著改善了患者生存，但其固定剂量给药模式面临严峻挑战：这些药物普遍存在显著的个体间药代动力学差异，且多数存在暴露量-疗效/毒性关系。临床实践中，当患者出现疑似吸收不良、药物相互作用(如CYP酶介导)或不良反应时，治疗药物监测(TDM)成为优化治疗的关键手段。然而，现有分析方法多局限于动物研究或单一药物检测，缺乏能同时覆盖多个人类血浆样本中靶向药物的标准化检测方案。

为突破这一技术瓶颈，荷兰癌症研究所(Netherlands Cancer Institute)的研究团队在《Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis》发表研究，成功开发并验证了可同步定量九种靶向药物的LC-MS/MS方法。研究人员采用Acquity BEH C18色谱柱，建立0.1%甲酸水溶液-乙腈甲醇(50:50,v/v)的阶梯梯度洗脱系统，结合正离子模式串联质谱检测。样本前处理采用乙腈沉淀蛋白后0.1%甲酸水稀释的简化流程。关键技术亮点包括：针对不同药物的药代特性定制检测范围(如ensartinib需50-50,000 ng/mL宽动态范围，lorlatinib仅需10-1,000 ng/mL高灵敏度)；通过稳定性测试发现entrectinib在-20℃仅稳定35天(其他药物达157天)，为临床样本运输提出干冰保存建议；验证阶段74例临床样本的成功检测证实了方法的实用性。

主要研究结果体现在：

1. 方法学验证：所有药物在各自线性范围内R²>0.99，准确度85-115%，日内/日间精密度<15%，符合FDA指南要求。
2. 稳定性特征：室温下adagrasib/entrectinib/sotorasib仅稳定3天，而其他药物稳定7天；长期冷冻稳定性显示entrectinib成为"最不稳定"药物(-20℃35天)。
3. 临床应用：检测74例患者血浆样本时，仅1例超出验证范围，证实方法对真实世界样本的适用性。

该研究的突破性在于首次建立覆盖九种重要靶向药物的标准化TDM平台，解决了多药联用趋势下的检测技术难题。特别值得注意的是，研究者发现不同药物稳定性差异显著，这对临床样本处理流程具有直接指导价值——例如entrectinib检测需优先安排，而sotorasib样本建议72小时内处理。方法中采用的同位素内标(¹³C,²H₃-lorlatinib等)策略有效克服了基质效应挑战。这些成果不仅为个体化用药提供技术支撑，更为探索靶向药物的暴露-效应关系、药物相互作用等研究奠定基础，推动肿瘤精准治疗向"剂量个体化"迈出关键一步。正如通讯作者Alwin D.R. Huitema团队强调的，该方法特别适用于CYP3A4介导的药物相互作用场景，而该酶正是多数靶向药代谢的关键通路。随着NTRK/RET等罕见靶点药物应用增多，这种高效的多重检测技术将显现更大价值。