绿色高效LC-MS/MS法同步定量分析舒巴坦酯与丙磺舒：方法学优化验证及药代动力学应用

本研究针对多重耐药尿路感染(uUTIs)治疗药物Orlynvah(舒巴坦酯+丙磺舒复方制剂)缺乏同步生物分析方法的难题，开发了基于Box-Behnken设计优化的绿色LC-MS/MS检测技术。该方法在10-400 ng/mL范围内线性优异(LOD~3 ng/mL)，采用乙醇替代乙腈实现环境友好，并通过AGREE等多项绿色评估工具验证(评分>65)，成功应用于大鼠药代研究，为口服碳青霉烯类药物的临床转化提供了关键技术支撑。

　　

尿路感染(UTIs)作为全球最常见的细菌感染之一，每年困扰着数亿女性患者。随着抗生素滥用导致的耐药性问题日益严峻，传统口服抗生素如环丙沙星对耐氟喹诺酮病原体的治疗效果显著下降。更棘手的是，虽然静脉用碳青霉烯类药物对耐药菌有效，但门诊患者亟需高效口服替代方案。在这一背景下，由舒巴坦酯(sulopenem etzadroxil)与丙磺舒(probenecid)组成的固定剂量复方制剂Orlynvah应运而生——前者是广谱青霉烯类抗生素，后者通过抑制肾脏有机阴离子转运体(OATs)延长药物半衰期。然而，该复方制剂缺乏同步生物分析方法，严重阻碍了其药代动力学研究和临床转化。

来自柴坦尼亚大学(Chaitanya Deemed to be University)药学系的研究团队在《Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis Open》发表研究，成功开发出首个同步检测舒巴坦酯与丙磺舒的绿色LC-MS/MS方法。研究人员采用质量源于设计(QbD)理念，通过Box-Behnken设计优化乙醇比例(40-60%)、流速(0.8-1.2 mL/min)和pH(2.8-3.2)等关键参数，最终建立的方法在10-400 ng/mL范围内线性优异(R2>0.999)，LOD达3 ng/mL，回收率>93%。创新性地采用乙醇替代传统乙腈作为有机相，结合AGREE、ComplexGAPI等评估工具证实其绿色属性(综合评分>65)。应用该方法开展的大鼠药代研究显示，舒巴坦酯达峰时间(T_max)为1小时，半衰期(t_1/2)2小时；而丙磺舒T_max延迟至3小时，t_1/2延长至8小时，证实二者药代互补性。

关键技术包括：1) 基于响应面法优化色谱条件；2) 采用电喷雾电离(ESI)正离子模式和选择反应监测(SRM)提升灵敏度；3) 以美罗培南(meropenem)为内标建立基质匹配校准曲线；4) 通过蛋白沉淀法处理大鼠血浆样本；5) 运用非房室模型计算药代参数。

研究结果部分：
3.1 DoE方法优化：通过15次实验构建二次多项式模型，确定最佳条件为乙醇50%、流速1.0 mL/min、pH 3.0，预测与实测偏差<5%。
3.3 方法验证：日内/日间精密度(%CV)<1.6%，基质效应<5%，冻融稳定性恢复率>95%，满足EMA指南要求。
3.5 药代动力学：丙磺舒使舒巴坦酯AUC_0-∞提升至219 ng·h/mL，证实其抑制肾脏清除效果。
3.6 绿色评估：AGREEprep评分0.67显示样品预处理环节环境友好，BAGI评分75确认方法实用性与可持续性平衡。

该研究首次实现舒巴坦酯与丙磺舒的同步精准定量，解决了复方制剂药代研究的核心技术瓶颈。方法创新性地将绿色化学原则融入生物分析全过程——乙醇替代减少32%有机溶剂消耗，低温蛋白沉淀降低能耗。药代数据验证了丙磺舒通过OATs抑制延长舒巴坦酯暴露时间的协同机制，为口服碳青霉烯类药物对抗耐药菌感染提供了重要技术支撑。这项工作不仅为Orlynvah的临床开发奠定基础，更为生物分析方法的环境可持续性树立了新标杆。