辣椒黄环斑病毒SYBR Green绝对实时定量PCR检测技术的建立与应用

为解决辣椒黄环斑病毒(CYRSV)快速检测难题，云南省农业科学院研究人员开发了基于SYBR Green的绝对实时定量PCR(qPCR)技术。该研究针对CYRSV核衣壳蛋白(N)基因设计特异性引物，实现75.81%阳性检出率，为病毒监测提供高灵敏度方法，论文发表于《Journal of Virological Methods》。

　　

近年来，云南辣椒和番茄种植区出现一种新型病毒威胁——辣椒黄环斑病毒(CYRSV)，其引发的黄环斑、坏死等症状与番茄斑萎病毒(TSWV)高度相似，但传统检测方法难以区分。这种隶属于正交托孢病毒属(Orthotospovirus)的新病原体，通过三节段单链RNA基因组(S、M、L)编码多种功能蛋白，其中核衣壳蛋白(N)因其高度保守性成为诊断靶标。随着云南蔬菜贸易量增长，CYRSV已从红河州扩散至元谋县等地，导致2024年番茄样本中75.8%的感染率，严重威胁"南菜北运"基地的产业安全。

云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所的研究团队在《Journal of Virological Methods》发表的研究，建立了基于SYBR Green染料的绝对定量PCR检测体系。关键技术包括：1) 从GenBank获取CYRSV N基因序列设计特异性引物；2) 通过熔解曲线分析(81±0.5°C特征峰)验证特异性；3) 对2024年元谋县62份番茄样本进行田间验证。

【特异性分析】仅CYRSV阳性样本出现显著扩增曲线，与TSWV、TZSV及健康样本无交叉反应，熔解曲线呈现单一峰值，证实引物可区分相近病毒。

【灵敏度验证】标准曲线显示检测下限达10²拷贝/μL，较常规PCR灵敏度提升100倍，能识别潜伏感染植株。

【田间应用】在2024年监测中，47份阳性样本证实该方法适用于大规模流行病学调查，为云南跨境蔬菜病害防控提供技术支撑。

该研究突破性地解决了Orthotospovirus属病毒鉴别诊断难题。建立的qPCR技术不仅实现CYRSV准确定量，其N基因靶向设计策略更为其他植物RNA病毒检测提供范式。值得注意的是，方法中SYBR Green染料虽存在非特异性结合缺陷，但通过熔解曲线质控保障了结果可靠性。随着Zhang等学者揭示CYRSV向西北地区扩散的趋势，这项技术将成为监测病毒传播动态的关键工具，对保障我国蔬菜安全生产具有重要实践意义。