新型小分子抑制剂M6766选择性抑制ERO1α预防动脉血栓和缺血性卒中的机制研究

为解决动脉血栓形成和缺血性卒中防治中出血风险高的临床难题，研究人员通过高通量筛选发现选择性内质网氧化还原酶1α（ERO1α）抑制剂M6766。该化合物通过结合FAD结合口袋特异性抑制ERO1α（IC50 1.4 μM），显著降低血小板活化关键指标（αIIbβ3整合素激活、Ca2+动员等），在动物模型中证实其抗血栓作用不延长出血时间，为开发安全抗栓药物提供了新靶点。

　　

在心血管疾病防治领域，动脉血栓形成导致的缺血性卒中始终是威胁人类健康的重大挑战。当前临床常用的抗血小板药物如αIIbβ3拮抗剂虽能有效抑制血栓，却难以避免出血风险增加的副作用。这种"抗栓-出血"的平衡难题，促使科学家们不断寻找更安全的治疗靶点。近年研究发现，内质网氧化还原酶1α（Endoplasmic Reticulum Oxidoreductase 1α, ERO1α）在血小板活化过程中扮演关键角色，这为破解上述困境提供了新思路。

研究人员通过系统性研究揭示了ERO1α在血栓形成中的核心作用。首先采用条件性基因敲除技术构建了巨核细胞特异性Ero1α/β双敲除小鼠模型，证实ERO1α缺失可显著抑制血小板活化和聚集。随后通过高通量筛选39,901种化合物，成功鉴定出新型小分子抑制剂M6766，该化合物对ERO1α表现出高度选择性（IC₅₀ 1.4 μM；K_D 1.1 μM），且对相关酶ERO1β的抑制活性较弱（IC₅₀ 7.2 μM）。分子对接模型显示M6766特异性结合于ERO1α的FAD结合口袋，这种独特作用机制使其具有>70倍的选择性优势。

研究采用多项关键技术：高通量化合物筛选鉴定抑制剂；表面等离子共振测定结合常数（K_D）；条件性基因敲除小鼠模型验证靶点功能；微流控芯片模拟动脉剪切力下的血小板黏附；小鼠颈动脉血栓和大脑中动脉闭塞模型评估药效。

研究结果部分：

1. M6766的抑制作用机制
   通过生化实验证实M6766浓度依赖性抑制多种激动剂诱导的血小板颗粒分泌、αIIbβ3整合素激活和Ca²⁺动员，但不影响活性氧产生。特别发现M6766预处理可减少ERO1α与钙离子感应蛋白STIM1的结合。

2. 基因敲除验证靶点特异性
   巨核细胞特异性Ero1α/β双敲除小鼠表现出血小板功能缺陷，而单独敲除Ero1β无显著影响。M6766对Ero1α/β双敲除血小板的无效作用证实其对ERO1α的高度特异性。

3. 抗血栓效应评估
   在动脉剪切条件下，M6766显著抑制血小板在胶原表面的聚集。小鼠模型中静脉注射M6766可减少动脉血栓形成和脑梗死体积，且不延长尾部出血时间，与临床常用αIIbβ3拮抗剂eptifibatide形成鲜明对比。

这项研究首次证实选择性抑制ERO1α可安全有效地预防动脉血栓形成和缺血性卒中。M6766通过独特作用机制规避了传统抗栓药物的出血风险，其>70倍的选择性为靶向药物设计树立了新标准。研究不仅阐明了ERO1α-STIM1-Ca²⁺信号轴在血小板活化中的核心地位，更为开发新一代抗血栓药物提供了候选化合物。这种"精准抗栓"策略有望改变当前临床治疗格局，对心脑血管疾病的防治具有重要转化价值。