Flemiphilippinin A通过c-Myc驱动内质网应激和CHOP介导的线粒体功能障碍诱导肺癌细胞副凋亡的机制研究

本研究揭示中药活性成分Flemiphilippinin A（Flp-A）通过靶向c-Myc诱发过度内质网应激（ER stress），促使CHOP在线粒体积累并破坏氧化磷酸化（OXPHOS），从而触发非凋亡性细胞死亡——副凋亡（paraptosis）。该发现不仅阐明了Flp-A抗肺癌的新机制，更为克服EGFR-TKI耐药提供了联合治疗新策略。

　　

肺癌长期占据全球癌症发病率和死亡率首位，尽管靶向治疗如吉非替尼（gefitinib）取得进展，但肿瘤细胞通过凋亡逃逸产生的耐药性仍是临床难题。传统中药因其多靶点特性成为研究热点，其中 Flemingia prostrata 提取的异黄酮化合物Flemiphilippinin A（Flp-A）虽显示抗肿瘤活性，其机制却未明确。广西中医药大学的研究团队在《PhytoKeys》发表论文，首次揭示Flp-A通过非凋亡途径——副凋亡杀伤肺癌细胞的分子机制。

研究采用MTT法、活细胞3D成像、转录组测序、线粒体压力检测（Seahorse XF）、分子对接和CETSA（细胞热转移实验）等技术，结合小鼠移植瘤模型验证。通过构建吉非替尼耐药细胞株（A549/GR），探索了联合用药的协同效应。

Flp-A抑制肺癌增殖并诱导细胞质空泡化
Flp-A（30 μM）处理12小时显著抑制A549、NCI-H1975等细胞系活力（MTT检测），活细胞成像显示随时间推移出现特征性胞质空泡，电镜证实空泡源于内质网和线粒体肿胀。

Flp-A通过ER/线粒体肿胀诱导副凋亡
JC-1染色显示线粒体膜电位（ΔΨm）丧失，ER-Tracker标记证实内质网扩张。不同于凋亡，Flp-A诱导的死亡不被Z-VAD-FMK（凋亡抑制剂）阻断，但被转录抑制剂Actinomycin D（AD）逆转，且副凋亡标志蛋白Alix表达下调。

c-Myc驱动的ER应激过度激活是关键机制
转录组分析锁定c-Myc为潜在靶点，分子对接显示Flp-A结合c-Myc的GLU-388/PRO-391位点（结合能-7.8 kcal/mol）。CETSA证实Flp-A直接稳定c-Myc蛋白，沉默c-Myc可逆转ER应激标记物（GRP78/XBP1s）上调和ROS积累。

CHOP介导线粒体功能障碍
免疫荧光显示CHOP在线粒体富集，伴随谷氨酰胺耗竭（4小时下降40%）。CHOP敲除实验证实其作为ER应激下游效应子，通过破坏氧化磷酸化（OCR下降65%）促进副凋亡。

体内外协同克服吉非替尼耐药
小鼠模型中Flp-A（20 mg/kg）抑瘤效果优于吉非替尼（40 mg/kg），且无显著毒性。联合低剂量Flp-A（4 μM）可使耐药细胞对吉非替尼敏感性恢复，机制涉及ER应激阈值突破和Alix蛋白下调。

该研究首次阐明Flp-A通过c-Myc/ER stress/CHOP轴触发副凋亡的级联机制，突破传统凋亡疗法的局限性。尤为重要的是，Flp-A与吉非替尼的协同作用为逆转EGFR-TKI耐药提供新思路，其植物来源特性更凸显临床转化潜力。未来需进一步探索c-Myc转录调控网络及CHOP在线粒体的精确作用位点，以优化联合治疗方案。