基于磁性固相萃取-同位素稀释LC-MS/MS技术的血清甲胎蛋白精准定量新方法

本研究针对甲胎蛋白(AFP)免疫检测方法间差异大的临床痛点，开发了磁性固相萃取结合同位素稀释LC-MS/MS(MSPE-ID-LC-MS/MS)的创新检测体系。通过高亲和力抗体修饰磁珠富集低丰度AFP，优化三肽标志物定量策略，实现1.5 ng/mL检测限与SI可溯源结果，为肝癌诊断提供了标准化参考方法。

　　

在肝癌早期诊断领域，甲胎蛋白(AFP)检测犹如一把"双刃剑"——这个70 kDa的糖蛋白虽是临床金标准，但不同实验室间的检测结果差异可达30%以上。这种混乱局面源于免疫检测方法(如ELISA、CLIA)缺乏标准化，犹如用不同刻度的尺子测量同一物体。更棘手的是，传统质谱技术面对血清中低丰度AFP时，常遭遇基质效应和酶解不完全的"拦路虎"，导致检测灵敏度不足。

中国计量科学研究院的研究团队在《Talanta》发表的研究中，创新性地将磁性固相萃取(MSPE)与同位素稀释液相色谱-串联质谱(ID-LC-MS/MS)技术联姻。他们采用双抗体修饰磁珠作为"分子鱼钩"，在血清中精准捕获AFP；通过优化含0.1% TFA和10% ACN的洗脱体系，使蛋白回收率突破101%；创新性采用三肽定量策略(Cys24等)，使检测限降至1.5 ng/mL，较现有MS方法提升10倍灵敏度。

关键技术包括：1)高亲和力AFP抗体磁珠制备；2)同位素标记内标肽段合成；3)一锅法变性-烷基化-酶解流程；4)LC-MS/MS多反应监测(MRM)模式分析。研究使用国家标准物质GBW09227进行方法验证。

【方法验证】显示：日内/日间精密度<10%，线性范围1.5-500 ng/mL(R²>0.99)，完全满足临床需求。

【结论】部分证实该方法成功实现AFP检测的SI溯源，填补了现有免疫分析法与质谱技术间的"精度鸿沟"。特别值得注意的是，通过Cys24肽段的稳定定量，解决了糖基化异质性导致的检测偏差问题。

【局限性】指出当前仍缺乏全标记AFP内标蛋白，未来需扩大临床样本验证。这项研究不仅为AFP检测提供了"计量级"解决方案，其建立的MSPE-ID-LC-MS/MS技术框架，更为其他低丰度蛋白标志物(如PSA、CA125)的标准化检测开辟了新路径。正如研究者所述，这种将计量学原理融入临床蛋白检测的创新思路，或将重塑肿瘤标志物检测的质量控制体系。