印度钦奈屠宰场牛源非结核分枝杆菌的分子鉴定及流行病学意义

为解决非结核分枝杆菌(NTM)在印度牛群中的流行状况不明问题，研究人员通过hsp65基因测序技术对钦奈屠宰场115头牛的118份组织样本进行检测，鉴定出18种NTM菌种，其中Mycobacterium intracellulare等9种为人畜共患病原体。该研究首次系统揭示印度牛群NTM多样性，为完善牛结核病(bTB)诊断标准和公共卫生防控提供重要依据。

　　

在全球结核病防控取得进展的同时，一类被称为"伪装者"的微生物——非结核分枝杆菌(Non-tuberculous mycobacteria, NTM)正悄然引发新的健康危机。这些与结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis complex, MTBC)同属的病原体，既能导致与结核病相似的临床症状，又会干扰传统诊断方法，在人类医学和兽医领域都制造着双重麻烦。特别值得注意的是，近年来欧美国家NTM感染率持续攀升，美国每10万人中就有1.4-6.6例阳性培养结果，而这种现象在印度等发展中国家也初现端倪。更棘手的是，这些微生物不仅感染人类，还在看似健康的牲畜体内"潜伏"，其中牛作为重要的经济动物和潜在传染源，其携带NTM的状况却长期缺乏系统研究。

面对这一科学盲区，来自印度医学研究理事会(ICMR)资助项目组的研究人员开展了一项突破性调查。他们选择印度第四大城市钦奈的市政屠宰场作为研究现场，通过对屠宰牛只组织样本的分子检测，首次绘制出印度牛群NTM感染的"物种图谱"。这项发表在《Tuberculosis》的重要研究揭示：在检测的115头牛中，49份分离株经hsp65基因测序鉴定出18种NTM，其中包含9种已知的人畜共患病原体，为理解NTM在动物-人类-环境间的传播提供了关键证据。

研究团队采用多学科技术路线展开攻关。从钦奈屠宰场系统采集118份牛组织样本（包括支气管淋巴结、纵隔淋巴结等），通过罗氏培养基(LJ)和BACTEC MGIT 960系统进行培养，经抗酸染色初筛后，采用双重PCR同时靶向hsp65基因和MPT64基因进行确认，最终对阳性样本进行hsp65基因测序和系统发育分析。这种组合策略既保证了检测灵敏度，又能实现精确的物种鉴定。

【Study Site and Sample Collection】研究设计严格遵循印度实验动物控制与监督委员会(CCSEA)规范，所有样本均来自常规屠宰流程。采样覆盖多种组织类型，其中淋巴结样本占比最高（支气管淋巴结48份，纵隔淋巴结39份），这种设计能有效捕捉NTM的潜在感染部位。

【Culture and PCR】在118份初筛阳性样本中，研究人员观察到LJ培养基和MGIT系统均出现典型生长特征。通过Ziehl-Neelsen染色确认抗酸阳性后，采用特异性引物成功扩增出441 bp的hsp65基因片段，同时排除MPT64阳性样本（提示MTBC感染），确保后续分析针对纯NTM分离株。

【Discussion】物种鉴定结果令人惊讶：Mycobacterium intracellulare以9/49的占比成为最流行菌种，紧随其后的是新发现菌株Mycobacterium sp. strain 79_MI18_10584和M. elephantis（各6/49）。值得注意的是，M. fortuitum（5/49）、M. kansasii（4/49）等已知人类病原体也频繁出现。在淋巴结无可见病变的样本中检出NTM，暗示其可能存在无症状定植现象。这些发现与瑞士、中国等国的研究形成呼应，共同指向NTM在牲畜中的广泛分布。

【Conclusion】该研究突破性地证实：印度牛群携带的NTM不仅种类丰富，且包含多个人畜共患菌种。这些微生物虽不必然引发牛只发病，但可能通过两种途径影响公共卫生：一是作为潜在 zoonotic pathogen（人畜共患病原体）直接威胁人类健康；二是干扰牛结核病(bovine TB, bTB)诊断，导致假阳性结果和经济损失。特别值得关注的是，hsp65基因测序揭示的菌种多样性远超预期，包括M. intracellulare在内的多个菌种都能诱导与MTBC交叉的免疫反应，这为开发特异性诊断方法提出了新挑战。

这项研究的意义远超出学术范畴。论文通讯作者Kannan Palaniyandi团队强调，建立NTM主动监测系统已刻不容缓，尤其在印度这样结核病高负担国家，准确区分MTBC与NTM感染对临床治疗和疫情防控都至关重要。研究揭示的菌种分布特征，不仅为追溯感染来源提供分子标记，也为评估抗生素耐药性风险奠定基础。随着畜牧业集约化发展，理解NTM在"动物-环境-人类"三元传播链中的角色，将成为未来人兽共患病防控的关键环节。