放疗联合PD-1/TIGIT阻断通过CD8+ T细胞介导抗肿瘤远端效应与免疫记忆的机制研究

本研究针对PD-1单药治疗耐药难题，创新性探索放疗联合PD-1/TIGIT双阻断（RTPT）的协同机制。通过多模型小鼠实验证实，RTPT通过激活M1巨噬细胞极化，显著增强CD8+ T细胞浸润与功能逆转，诱导系统性抗肿瘤效应与长期免疫记忆，为临床克服免疫治疗耐药提供新策略。

　　

在肿瘤免疫治疗领域，PD-1抑制剂虽已改写多种癌症的治疗格局，但单药响应率不足20%的困境始终未解。TIGIT作为新兴免疫检查点，与PD-1共表达于耗竭性CD8⁺ T细胞，但临床数据显示双阻断疗法效果参差。更棘手的是，放疗虽能诱发"原位疫苗"效应，其与双检查点阻断的协同机制仍是黑箱。

武汉大学中南医院的研究团队在《Cancer Letters》发表的研究中，通过建立LLC、B16-F10等多细胞系双侧皮下瘤模型，采用8 Gy×3次放疗联合aPD-1/aTIGIT抗体（RTPT）的三联方案。运用流式细胞术定量免疫细胞亚群，结合多色免疫荧光定位细胞互作，单细胞转录组解析分子机制，并通过过继性T细胞移植验证免疫记忆功能。

3.1 放疗增强双阻断疗效并诱发远端效应
在三阴性肺癌（LLC）模型中，RTPT组原发瘤与远端瘤完全缓解率达37.5%，显著高于双药组（PT），且黑色素瘤（B16-F10）和结肠癌（MC38）模型验证了跨瘤种普适性。

3.2 CD8⁺ T细胞是效应核心
流式检测显示RTPT组CD8⁺ T细胞在瘤内浸润增加3.2倍，耗竭标志PD-1⁺/TIGIT⁺比例下降60%。特异性清除CD8⁺ T细胞后，三联方案完全失效。

3.3 M1巨噬细胞充当免疫放大器
单细胞测序揭示RTPT组M1巨噬细胞高表达STAT1/NF-κB通路基因，分泌的CXCL10/CCL5促进CD8⁺ T细胞聚集。巨噬细胞清除实验导致CD8⁺ T细胞功能丧失。

3.4 长效免疫记忆依赖中枢记忆T细胞
痊愈小鼠（CR）脾脏中CD8⁺ T_cm（中枢记忆T细胞）比例增加4倍，过继转移后可完全抵御二次肿瘤攻击。转录组显示记忆相关基因Tcf1/BCL6显著上调。

这项研究首次阐明放疗通过重塑M1巨噬细胞- CD8⁺ T细胞轴，突破双检查点阻断的疗效瓶颈。特别值得注意的是，8 Gy×3的放疗方案在激活天然免疫的同时未增加毒性，为临床转化提供剂量学依据。研究揭示的"原位疫苗-巨噬细胞重编程- T细胞记忆"三级联动机制，为设计新一代联合治疗方案提供了理论框架。未来需在PD-1/TIGIT共表达人群中进行生物标志物导向的临床试验验证。