基于金纳米粒子侧流免疫层析技术(GNP-LFIA)的杏仁及制品中苦杏仁苷快速检测方法开发与评价

为解决杏仁及制品中苦杏仁苷(AMY)传统检测方法操作复杂、耗时长的问题，研究人员通过半抗原计算设计和单克隆抗体制备，开发出灵敏度达0.66 ng/mL的GNP-LFIA检测技术，实现10分钟内完成0.27–1.27 μg/kg水平的快速现场检测，为食品安全监管提供新工具。

　　

杏仁作为广受欢迎的坚果食品，其含有的苦杏仁苷(AMY)在酶解或酸性条件下会释放剧毒的氢氰酸(HCN)，欧盟规定杏仁制品中AMY上限为593 mg/kg。传统检测依赖HPLC、UHPLC-(ESI)QqQ MS/MS等仪器方法，存在设备昂贵、操作复杂等缺陷。针对这一食品安全检测难题，江南大学食品科学与技术国家重点实验室的研究团队创新性地将计算化学与免疫分析技术结合，开发出便携式金纳米粒子侧流免疫层析(GNP-LFIA)检测系统，相关成果发表于《Food Chemistry》。

研究团队采用三大关键技术：1）基于分子相似性计算和空间构象分析设计半抗原，通过Tanimoto系数筛选(AMY-Hapten-1达0.71)；2）制备IC₅₀为0.66 ng/mL的高特异性单克隆抗体3D11；3）构建集成化检测试剂盒，搭配便携式读条仪实现现场检测。

【Hapten分析】通过分子静电势分布和HOMO-LUMO轨道分析，证实设计的半抗原能充分暴露AMY抗原表位，为抗体高特异性奠定基础。
【抗体性能】获得的mAb 3D11对结构类似物(如prunasin)交叉反应率<1.2%，IC₅₀较文献报道ELISA提高300倍。
【方法验证】实际样本检测回收率94.02–109.50%，可视化检测限2–10 μg/kg，仪器读值限0.27–1.27 μg/kg，满足欧盟标准要求。

该研究突破传统检测技术瓶颈，首创将分子模拟计算应用于AMY免疫检测体系设计，开发的GNP-LFIA在10分钟内即可完成检测，较ELISA提速6倍。特别值得注意的是，团队通过HOMO-LUMO轨道分析揭示氰基(-CN)作为关键抗原决定簇，这一发现为其他植物毒素抗体开发提供了新思路。便携式检测系统的成功研制，使得杏仁原料采购、生产加工等非实验室场景下的现场质控成为可能，对防范AMY中毒事件具有重要实践价值。