腰果寡肽通过抑制NF-κB信号通路激活调控肥大细胞脱颗粒的抗过敏机制研究

针对现有抗过敏药物长期使用副作用大的问题，研究人员从腰果蛋白中分离出新型寡肽COP（序列：IIAIPAGVAH），通过双酶水解和质谱鉴定技术，证实其能显著抑制肥大细胞脱颗粒及TNF-α、IL-6等炎症介质释放，机制涉及阻断NF-κB p65核转位。该研究为开发天然来源的抗过敏制剂提供了新策略。

　　

过敏性疾病在全球范围内呈快速增长趋势，其中I型超敏反应如过敏性鼻炎、哮喘和特应性湿疹等，主要由肥大细胞介导的免疫反应引发。当前临床使用的抗组胺药、白三烯抑制剂等长期使用易引发嗜睡、口干等副作用，亟需开发更安全有效的替代疗法。天然活性肽因其低分子量和多重生物活性成为研究热点，但现有肽类抑制剂多局限于阻断抗原表位或非特异性抑制介质释放，缺乏对核心信号通路的精准调控。

针对这一科学问题，来自中国的研究团队创新性地从腰果蛋白中挖掘抗过敏肽资源。研究人员采用亚临界水萃取技术高效提取腰果蛋白，通过碱性蛋白酶和菠萝蛋白酶两步酶解获得分子量<3 kDa的寡肽组分，经凝胶色谱分离纯化后，利用LC-MS/MS鉴定出全新九肽序列IIAIPAGVAH（分子量961.15 Da）。通过建立IgE介导的P815肥大细胞脱颗粒模型，结合分子对接技术，系统评估了该寡肽（COP）的抗过敏效应及分子机制。

关键技术包括：1）亚临界水萃取结合响应面法优化蛋白提取工艺；2）双酶分步水解与超滤分离低分子量肽段；3）Sephadex G-25/G-15凝胶色谱联用活性追踪；4）LC-MS/MS鉴定活性肽序列；5）流式细胞术检测Ca²⁺内流；6）激光共聚焦显微技术观察NF-κB p65核转位。

3.1 亚临界水萃取腰果蛋白的结构优势
通过单因素和响应面实验确定最佳提取条件为pH 11、料液比1:45 g/mL、130°C处理5分钟，蛋白得率达47.4%。红外光谱显示亚临界法提取的蛋白具有完整酰胺II带（1510-1570 cm^-1），扫描电镜观察到更小的蛋白碎片结构，为后续酶解创造有利条件。

3.2 活性肽的制备与结构特征
经Sephadex G-15纯化的P4-2组分在RP-HPLC中呈现高纯度单峰，质谱鉴定出新型九肽IIAIPAGVAH。分子对接显示该序列与IgE（结合能-8.104 kcal/mol）和NF-κB p65（-5.356 kcal/mol）具有强亲和力，预示其可能通过双重靶点发挥作用。

3.3 IgE介导的肥大细胞脱颗粒模型
建立0.5 μg/mL抗DNP-IgE致敏联合0.6 μg/mL DNP-BSA刺激60分钟的标准化模型。醛品红染色显示致敏细胞颗粒增多，溶酶体荧光探针证实颗粒含量增加2.1倍，β-己糖胺酶（β-HEX）释放率达78.6%。

3.4 COP抑制脱颗粒的分子机制
400 μg/mL COP处理使β-HEX、组胺、LTC₄释放分别降低62.3%、57.8%和49.2%，并显著抑制Ca²⁺内流（p<0.001）。免疫荧光证实COP阻断NF-κB p65核转位，使TNF-α阳性区域面积减少68.4%，提示其通过抑制经典NF-κB通路下调促炎因子表达。

该研究首次揭示腰果来源寡肽COP通过"膜受体-信号转导-转录调控"三级作用模式抑制肥大细胞活化：1）直接干扰IgE与FcεRI结合；2）阻断Ca²⁺依赖性脱颗粒过程；3）抑制NF-κB p65磷酸化及核转位。相较于传统抗过敏药物，COP具有多靶点、低毒性的优势（细胞存活率>90%），为开发功能性抗过敏食品或药物提供了先导化合物。论文发表于《Food Chemistry: X》，为天然活性肽在免疫调节领域的应用开辟了新方向。