直肠拭子大规模培养法：一种高效筛查AmpC、ESBL和碳青霉烯酶产物的创新策略

这篇研究开发了一种基于复制平板技术的大规模培养方法，可同时检测直肠拭子中的AmpC、ESBL和碳青霉烯酶（carbapenemase）生产者。通过头孢曲松（ceftriaxone）富集后，采用头孢西丁（cefoxitin）、头孢吡肟（cefepime）和亚胺培南（imipenem）选择性压力区分三类β-内酰胺酶，其灵敏度达100%，且能识别更广谱的耐药菌株，为耐药菌（AMR）监测提供了高效工具。

　　

ABSTRACT

革兰阴性杆菌产生的β-内酰胺酶（AmpC、超广谱β-内酰胺酶ESBL和碳青霉烯酶）是难治性感染的主要病因。研究团队开发了一种创新的大规模培养策略：通过头孢曲松（1.5 μg/mL）富集麦康凯琼脂（MAC）上的目标菌株，再经复制平板在头孢西丁（32 μg/mL）、头孢吡肟（16 μg/mL）和亚胺培南（4 μg/mL）压力下区分三类酶生产者。该方法在混合培养中成功鉴别不同耐药机制菌株，对直肠拭子的ESBL检测灵敏度达100%，且特异性优于传统方法。

INTRODUCTION

β-内酰胺耐药革兰阴性杆菌的传播已成为全球公共卫生危机。现有监测方法存在局限性：分子检测常忽略未知β-内酰胺酶家族，而靶向培养无法反映宿主内多种耐药菌共存情况。研究提出通过单一样本的复制平板技术，实现表型分型的同时保留样本完整性。

MATERIALS AND METHODS

Protocol standardization
实验采用三种特征菌株：产CTX-M-15的肺炎克雷伯菌（黏液型菌落）、产CMY-2的大肠杆菌（不透明菌落）和产VIM-2的铜绿假单胞菌（边缘不规则菌落）。通过3D打印的弹性天鹅绒复制装置，将富集菌落转移至含梯度浓度抗生素的平板，最终确定最佳药物浓度。

Accuracy evaluation
对比商业显色培养基（CESBL），25份直肠拭子测试显示：两种方法均检出10份ESBL阳性样本，但大规模培养法假阳性更低（8 vs 12），且额外发现4例pAmpC和1例NDM阳性菌株。

RESULTS AND DISCUSSION

1. 差异化生长模式：头孢吡肟平板仅允许ESBL和碳青霉酶生产者生长，头孢西丁平板筛选AmpC和碳青霉酶菌株，亚胺培南平板专属性最强。
2. 临床样本验证：某志愿者样本中检出产CTX-M-79/55的ESBL大肠杆菌，以及天然耐药的柠檬酸杆菌和假单胞菌。
3. 耐药基因多样性：在ESBL阳性菌中鉴定出CTX-M-1/2/8/9、TEM和SHV基因组合，其中一株大肠杆菌同时携带CMY-like和NDM基因。

该方法优势在于：

• 避免天然耐药菌干扰（如假单胞菌）
• 单次实验可获多重耐药谱
• 适用于环境样本拓展研究

局限性在于需延长1天培养时间，更适合中心实验室的耐药监测而非快速诊断。

IMPORTANCE

肠道作为多重耐药菌储存库，其监测对理解耐药传播至关重要。该技术通过表型分型揭示了传统方法难以捕捉的耐药动态，例如同一宿主内ESBL与碳青霉酶菌株共存现象。未来可适配尿液、土壤等复杂样本，为临床和环境耐药研究提供新视角。

（注：全文严格依据原文数据，未添加主观推断；专业术语如CTX-M-15、VIM-2等均保留原文格式；去除了文献引用标识及图表标注）