使用CaMV 35S、FMV 34S和T-Nos标记物开发并验证针对转基因植物的稳健实时PCR检测方法

《Journal of Plant Biochemistry and Biotechnology》：Development and validation of robust real-time PCR assays for genetically modified plants using CaMV 35 S, FMV 34 S, and T-Nos markers

1. 转基因作物检测需高效便捷方法，本研究开发三种实时荧光PCR双联检测法，靶向CaMV 35S、FMV 34S和T-Nos基因，灵敏度达10 copies/μl，符合ISO 17025国际标准，适用于大豆和玉米等作物转基因初筛。

　　

摘要

市场上转基因作物的数量和种类持续增加；因此，开发简单、快速且有效的转基因生物（GMO）检测方法对于监测其非法流入、确保符合安全标准及监管要求至关重要。转基因作物可以通过DNA检测技术（如PCR和qPCR）、基于蛋白质的检测技术（如ELISA）以及在需要透明度的监管框架下采用的田间采样策略来进行识别。实时PCR检测方法是目前用于识别转基因植物材料的最有效手段。本文介绍了针对三种常见转基因元件的新型筛查检测方法的开发和验证过程：花椰菜花叶病毒（CaMV）的35S启动子（P35S）、菝葜花叶病毒（FMV）的34S启动子（pFMV），以及来自根癌农杆菌的诺帕林合成酶终止子（T-Nos）。优化后的实时PCR检测方法对这些目标元件表现出高度特异性，并且灵敏度足以在植物核酸背景中检测到低至每微升十个拷贝的合成模板。此外，这些检测方法还能与植物内控样本同时进行双重检测，而不会影响对目标元件的灵敏度。研究结果表明，这三种双重检测方法结合起来可以构成一种可靠且灵敏的转基因生物初步筛查工具。我们的检测方法对于全球范围内的转基因生物入侵初步筛查具有特别价值，尤其适用于大豆和玉米作物。本研究开发的三种检测方法均符合国际认证标准，并已获得新西兰国际认证机构（IANZ - ISO 17025）的批准使用。