WTAP介导的circRNA_404908 m6A甲基化通过miR-3059-5p/ANO1轴促进食管鳞癌进展的机制研究

为解决食管鳞癌（ESCC）中m6A修饰与circRNA的调控机制不明问题，研究人员聚焦WTAP介导的circRNA_404908 m6A甲基化，发现其通过ceRNA机制吸附miR-3059-5p上调ANO1表达，驱动ESCC恶性进展。该研究揭示了WTAP-circRNA_404908/miR-3059-5p/ANO1轴的关键作用，为ESCC靶向治疗提供新策略。

　　

食管鳞癌（ESCC）是全球高发的恶性消化道肿瘤，五年生存率不足20%，其分子机制亟待阐明。近年来，RNA表观修饰尤其是N6-甲基腺苷（m⁶A）与环状RNA（circRNA）的交叉调控成为肿瘤研究热点，但WTAP介导的m⁶A修饰如何通过circRNA影响ESCC进展仍属空白。针对这一科学问题，南充市中心医院的研究团队通过多组学分析结合功能实验，首次揭示WTAP-circRNA_404908/miR-3059-5p/ANO1轴在ESCC中的致癌机制，相关成果发表于《Journal of Biological Chemistry》。

研究采用TCGA/GEO数据库分析、m⁶A-circRNA表观转录组芯片、MeRIP-qPCR（甲基化RNA免疫沉淀定量PCR）、双荧光素酶报告基因等技术，结合44例ESCC临床样本验证和裸鼠移植瘤模型，系统解析了WTAP通过m⁶A修饰调控circRNA_404908的分子机制。

WTAP在ESCC中高表达且预示不良预后
通过TCGA和GSE161533数据集分析发现，WTAP在ESCC组织中显著上调（p<0.0001）。免疫组化显示71例患者癌组织中WTAP蛋白水平较癌旁升高3.2倍（p<0.0001），且与低分化程度正相关（p<0.05）。KYSE-150等ESCC细胞系中WTAP表达较正常食管上皮细胞HET-1A增加4-6倍（p<0.05），敲低WTAP可抑制细胞增殖、迁移和侵袭能力达50%以上。

WTAP通过m⁶A修饰调控circRNA_404908
表观转录组芯片筛选出69个WTAP依赖的m⁶A修饰circRNA，经RNase R消化和Sanger测序验证，circRNA_404908（源自PPME1基因5-9外显子）的m⁶A水平和表达量随WTAP敲低显著降低（p<0.01）。放线菌素D实验证实WTAP通过增强circRNA_404908稳定性维持其高表达。功能回复实验表明，过表达circRNA_404908可逆转WTAP敲低导致的ESCC恶性表型抑制。

circRNA_404908作为miR-3059-5p分子海绵
核质分离与FISH定位显示circRNA_404908主要分布于细胞质。生物信息学预测结合双荧光素酶报告基因验证，circRNA_404908通过5个结合位点吸附miR-3059-5p（荧光素酶活性降低60%，p<0.001）。在KYSE-150细胞中，circRNA_404908过表达使miR-3059-5p水平下降2.3倍（p<0.05），而miR-3059-5p模拟物可抵消circRNA_404908的促癌效应。

ANO1是下游关键效应分子
多数据库联合筛选发现ANO1（TMEM16A）是miR-3059-5p直接靶标。Western blot显示circRNA_404908过表达使ANO1蛋白水平增加2.1倍（p<0.05），而miR-3059-5p模拟物可抑制此效应。TCGA分析显示ANO1高表达与ESCC晚期临床分期（p<0.05）和不良预后显著相关。

这项研究首次阐明WTAP通过m⁶A修饰增强circRNA_404908稳定性，进而竞争性结合miR-3059-5p解除其对ANO1的抑制，最终促进ESCC进展的分子通路。不仅为理解m⁶A-circRNA交互作用提供新视角，更鉴定出WTAP、circRNA_404908和ANO1作为ESCC潜在治疗靶点。研究者特别指出，circRNA_404908在ESCC组织中的特异性高表达（较癌旁高4.5倍）使其具备成为诊断标志物的潜力，而靶向该通路的抑制剂开发可能为晚期ESCC患者带来新希望。