海胆源糖原MSGA通过极化M1型巨噬细胞增强吉西他滨抗胰腺癌活性及其JAK-STAT机制研究

这篇研究揭示了从中间球海胆（Strongylocentyotus internedius）提取的高分支糖原MSGA通过激活JAK1/3-STAT1通路并抑制STAT3，将巨噬细胞极化为CD86+ M1表型，显著提升促炎因子（iNOS/IL-6/TNFα/IL-12）分泌。MSGA诱导的M1巨噬细胞通过降低PDAC细胞活力、促进凋亡，并与吉西他滨（GEM）协同增强抗胰腺导管腺癌（PDAC）效果，为克服化疗耐药提供了新型免疫调节策略。

　　

3.1 MSGA极化巨噬细胞为CD86⁺ M1表型
研究首次发现400 μg/mL MSGA处理可使Raw264.7细胞中CD86⁺细胞比例从0.88%升至4.03%（p<0.001），同时CD206⁺细胞从58.1%降至32.4%。扫描电镜显示MSGA处理的巨噬细胞呈现典型M1形态——扁平状伴伪足突起，与IFN-γ/LPS诱导的M1表型相似。骨髓来源巨噬细胞（BMDMs）实验进一步验证该效应，100 μg/mL MSGA即显著改变表型标记物表达（p<0.001）。

3.2 MSGA促进炎症因子释放
MSGA（400 μg/mL）刺激后，巨噬细胞分泌的NO、IL-6和TNFα水平显著升高（p<0.001）。qPCR检测显示M1标志基因（iNOS/IL-12p40/TNFα）mRNA表达上调达10-30倍，而M2相关基因（CD206/ARG1）表达被抑制（p<0.05）。这种"双刃剑"式调控表明MSGA能重塑免疫微环境。

3.3 MSGA通过M1巨噬细胞抑制PDAC细胞活力
Transwell共培养系统证实，MSGA条件培养基（CM）使四种PDAC细胞（PANC-1/ASPC-1/SW1990/MIA-PaCa-2）存活率显著降低（p<0.001）。值得注意的是，MSGA本身无直接细胞毒性，其抗肿瘤效果完全依赖巨噬细胞表型转换。激光共聚焦显示MSGA-CM处理的PANC-1细胞中促凋亡蛋白Bax表达增加，而抗凋亡蛋白Bcl-2减少。

3.4 MSGA增强吉西他滨疗效
当100 nM GEM与MSGA-CM联用时，PANC-1细胞凋亡率较单用GEM提高2.3倍（p<0.05）。流式细胞术检测显示MSGA-CM+HGEM组晚期凋亡细胞（Q2区）比例达28.7%，显著高于M2-CM+HGEM组（9.1%）。这种协同效应可能源于M1巨噬细胞分泌的活性氧（ROS）破坏了肿瘤细胞DNA修复机制。

3.5 JAK-STAT通路调控机制
Western blot揭示MSGA通过双重机制调控巨噬细胞极化：①激活JAK1/3-STAT1轴（磷酸化水平提升3.5倍，p<0.001），促进STAT1核转位；②抑制STAT3磷酸化（降低62%，p<0.001）。免疫荧光观察到MSGA组STAT3被排斥在核周区域，这种"空间隔离"效应可能解释其M2极化阻断作用。

4 讨论
该研究突破性地发现高分子量（2.65×10⁷ Da）高分支结构糖原的免疫调节活性。与传统认知不同，MSGA虽分子量超常规阈值仍保持强激活能力，提示分支密度可能比分子量更关键。从转化医学角度看，MSGA与GEM联用可破解PDAC化疗耐药难题——M1巨噬细胞既能直接杀伤肿瘤细胞，又能通过下调胞苷脱氨酶（CDA）减少GEM代谢失活。未来需开展体内实验验证其药代动力学特性，这种"免疫化疗"策略为胰腺癌治疗提供新思路。