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斑马鱼红锥细胞消融模型中新型色觉视动反应(CV-OMR)检测方法的开发与应用
【字体: 大 中 小 】 时间:2025年07月26日 来源:Lab Animal 5.9
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研究人员通过转基因斑马鱼模型(Tg(thrb:gal4;UAS:epNTR-p2a-mCherry))开展色觉视动反应(CV-OMR)检测新方法研究,利用甲硝唑(MTZ)诱导红锥细胞梯度消融,发现24小时MTZ处理组mCherry表达面积显著降至16.5±7.6μm2,CV-OMR曲线下面积分析可有效区分不同消融程度导致的色觉障碍,为眼病模型视觉功能评估提供新工具。
在视觉研究领域,斑马鱼凭借其清晰的视网膜结构和早期发育阶段的光学透明特性成为理想模型。这项研究创新性地开发了色觉视动反应检测法(Color Vision Optomotor Response, CV-OMR),用于评估转基因斑马鱼幼虫的红锥细胞特异性消融效果。
研究团队采用双重转基因斑马鱼系(Tg(thrb:gal4;UAS:epNTR-p2a-mCherry)),通过代谢前药甲硝唑(Metronidazole, MTZ)诱导选择性消融红锥细胞。在受精后5天(5 dpf),分别设置0小时、12小时和24小时MTZ处理组,对应形成Tg(+)MTZ(-)、Tg(+)MTZ(+)12h和Tg(+)MTZ(+)24h实验组。组织切片显示,标记红锥细胞的mCherry荧光面积呈现剂量依赖性减少:未处理组保持1,066.6±252.2μm2,而24小时处理组骤降至16.5±7.6μm2(P<0.001)。
受精后6天(6 dpf)进行的CV-OMR检测颇具巧思——采用双色刺激系统,通过计算幼虫起始点停留比例的曲线下面积(AUC)定量分析色觉功能。结果清晰显示,红锥细胞完整组[Tg(+)MTZ(-)]幼虫反应最敏捷,而完全消融组[Tg(+)MTZ(+)24h]表现显著迟缓,三组间AUC差异具有统计学意义。
这项研究证实CV-OMR可作为灵敏的色觉功能检测工具,其创新之处在于建立了红锥细胞消融程度与行为学指标的定量关联,为视网膜退行性疾病、色觉障碍等眼病研究提供了新型标准化评估方案。该方法未来或可拓展应用于其他视觉通路异常模型的表型分析。
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