抗CD19 CAR-T细胞疗法在血液肿瘤中的早期分子效应蛋白组学解析

推荐：研究人员针对CAR-T细胞治疗早期分子机制不明确的问题，通过构建抗CD19 CAR-Jurkat T细胞模型，结合SILAC标记和DIA质谱技术，揭示了CD74介导的抗原提呈及LCK、p38 MAPK等关键效应蛋白在CAR-T早期激活中的作用，为优化CAR设计提供新靶点。

　　

在癌症治疗领域，免疫疗法尤其是嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）疗法已成为革命性突破。然而，CAR-T细胞与靶细胞接触后的早期分子事件仍如"黑箱"，限制其疗效提升。据统计，2022年全球癌症新增病例达2000万例，其中血液肿瘤占重要比例。传统治疗手段面临耐药性和毒副作用等挑战，而CAR-T疗法虽在CD19阳性B细胞恶性肿瘤中展现显著效果，但不同CAR设计的信号传导差异及早期效应蛋白网络尚不明确。

针对这一科学难题，圣保罗研究基金会（FAPESP）资助的研究团队在《Journal of Proteomics》发表重要成果。研究人员采用第二代抗CD19 CAR-Jurkat T细胞模型，通过SILAC（稳定同位素标记氨基酸细胞培养）标记技术和DIA（数据非依赖采集）质谱方法，首次系统解析了CAR-T与RAJI B细胞接触10分钟内的蛋白质组动态变化。

研究关键技术包括：1）构建携带CD8α铰链区-CD28共刺激域-CD3ζ信号域的CAR-Jurkat细胞；2）SILAC重标RAJI B细胞与CAR-T细胞短期共培养；3）Orbitrap Astral平台DIA质谱检测；4）Dasatinib药物抑制验证LCK激酶功能。

【细胞模型构建】
通过慢病毒转染获得CAR表达率达80.5%的Jurkat T细胞，流式细胞术验证其特异性结合CD19阳性细胞的能力，为后续研究提供标准化效应细胞。

【早期蛋白组变化】
DIA质谱覆盖8800种蛋白质，发现CAR-T细胞中CD74介导的抗原提呈通路显著激活，靶细胞则呈现更广泛的蛋白质组重塑。关键效应蛋白CD247（CD3ζ）、CD28、DAP10、LCK、p38 MAPK和CASP3被验证参与T细胞激活级联反应。

【信号通路验证】
使用Dasatinib抑制LCK激酶后，CAR-T细胞活性显著降低，证实该激酶在早期信号传导中的核心地位。同时检测到pPLCγ1/2、Rac1/cdc42等下游效应分子磷酸化变化，揭示CAR特异性信号与经典TCR信号的交叉调控。

【分子机制探讨】
研究发现CAR-T细胞通过独特机制激活：既保留TCR样信号（如LCK-ZAP70轴），又触发CAR特异性通路。靶细胞则出现抗原提呈相关蛋白下调，提示CAR-T接触可能迅速干扰肿瘤细胞免疫逃逸机制。

该研究首次绘制了CAR-T治疗早期分子图谱，为克服临床耐药提供新思路：1）鉴定CD74等可作为疗效预测标志物；2）证实LCK抑制剂联合CAR-T的潜在协同价值；3）揭示p38 MAPK-CASP3轴调控细胞毒性的新机制。这些发现不仅推动下一代CAR结构优化，更为联合用药策略开发奠定理论基础，标志着肿瘤免疫治疗进入精准调控时代。