CCL19增强型DNA癌症疫苗的临床前评估：靶向抗原呈递细胞的新型免疫治疗策略

本研究针对肿瘤免疫治疗中DNA疫苗效力不足的问题，开发了靶向抗原呈递细胞（APC）的CCL19增强型DNA疫苗平台。通过将CCL19趋化因子与肿瘤特异性抗原（TSA）融合表达，显著提升了CD4+/CD8+ T细胞应答的强度和持久性，在多种小鼠模型中展现出强效抗肿瘤活性。研究采用电穿孔和无针注射系统等临床相关递送技术，证实该平台具有快速系统清除特性，并与免疫检查点阻断疗法（CPI）联用表现良好安全性，为个体化癌症疫苗开发提供了新思路。

　　

癌症免疫治疗领域近年来取得显著进展，但如何有效激活针对肿瘤特异性抗原（TSA）的免疫应答仍是重大挑战。传统DNA疫苗因抗原呈递效率低、免疫原性弱等问题，临床效果参差不齐。尤其对于肿瘤突变负荷（TMB）较低的患者，可用靶点数量不足进一步限制了治疗效果。

Evaxion Biotech（丹麦）的研究团队在《Cancer Immunology, Immunotherapy》发表的研究中，创新性地将CCL19趋化因子作为分子佐剂整合至DNA疫苗平台。该设计通过人IgG3衍生的h1h4CH3二聚化结构域，将TSA（包括新抗原和ERV抗原）定向递送至APC表面CCR7受体。研究人员采用多组学预测平台AI-Immunology^TM筛选抗原，通过ELISPOT、流式细胞术（ICS）和MHC多聚体染色等技术评估免疫应答，并在CT26小鼠模型中验证抗肿瘤效果。

关键方法

1. 构建含CCL19-二聚化结构域-TSA的模块化质粒
2. 采用电穿孔（EP）和Tropis^?无针注射系统（NFIS）递送
3. 通过MHC多聚体追踪循环抗原特异性T细胞
4. GLP毒理学实验评估重复给药安全性

CCL19增强疫苗的免疫优势
在剂量滴定实验中，含CCL19的疫苗（mCCL19-CH3-Neo13）仅需1μg剂量即可达到传统疫苗5μg的抗肿瘤效果。MHC多聚体分析显示，接种后第1天即可检测到2.5%的C1特异性CD8⁺ T细胞，较对照组提前7天出现应答。

递送系统优化
电穿孔组和NFIS组分别使抗原特异性CD8⁺ T细胞频率提升至12%和8%，显著高于传统针剂注射（2.5%）。两种设备诱导的免疫应答广度相似，但NFIS在长期随访中显示出更持久的CD4⁺ T细胞应答。

联合治疗潜力
与抗PD-1联用组相比，单用疫苗组虽未显著降低肿瘤负荷，但ICS分析显示联合治疗使双阳性（IFN-γ⁺TNF-α⁺）CD4⁺ T细胞增加3倍，提示协同效应。

安全性验证
GLP毒理实验证实，100μg剂量（NOAEL）每两周给药未见不良反应。ELISA检测显示hCCL19-CH3蛋白在血清中14天内完全清除，静脉注射重组CCL19的半衰期<1小时。

抗原兼容性
插入不同人类黑色素瘤新抗原（hM1-4）的疫苗均保持稳定表达。含ERV/新抗原混合序列的CCL19-CH3-Neo5/Erv8疫苗，可同时激活针对5种新抗原和5种ERV抗原的T细胞应答。

该研究创新性地通过CCL19靶向递送策略解决了DNA疫苗免疫原性不足的核心问题。平台设计具有三大临床优势：1）模块化结构支持快速更换TSA组合；2）与现有CPI疗法兼容；3）通过ERV抗原扩展低TMB患者适用性。尤其值得注意的是，疫苗诱导的T细胞应答可持续1年以上，且加强免疫能进一步放大免疫记忆。这些发现为推进个体化癌症疫苗的临床转化提供了重要依据，特别对解决当前"冷肿瘤"免疫治疗难题具有启示意义。