基于质量源于设计(QbD)理念的Bilastine片剂五种杂质HPLC定量分析方法开发及稳健性研究

本研究针对抗组胺药Bilastine(BLS)片剂质量控制需求，开发了基于X Bridge Shield RP18色谱柱的梯度洗脱HPLC方法，采用质量源于设计(QbD)理念通过Design-Expert软件进行稳健性验证，成功实现五种杂质（羟基杂质、酸杂质、二酸杂质等）的同步检测，验证参数符合ICH Q2(R1)要求，填补了现有药典标准空白。

　　

过敏性疾病治疗药物Bilastine(BLS)作为第二代H₁受体拮抗剂，在临床广泛应用于过敏性鼻炎和慢性特发性荨麻疹。然而当前主要药典尚未建立完整的BLS原料药质量标准，文献报道的检测方法多局限于单一杂质或组合药物分析，缺乏系统性的杂质控制方案。尤其值得注意的是，已有研究仅能检测2种杂质（Terzi? J等）或1种氧化降解产物（Ouarezki R等），而LC-Q-TOF-MS虽能分离4种杂质但未建立定量方法。这种现状严重制约了药品质量控制的可靠性，可能影响临床用药安全。

针对这一技术瓶颈，来自印度海得拉巴某制药公司的Lankella Sasikala研究团队在《Results in Chemistry》发表了创新性研究成果。研究人员开发了基于磷酸盐缓冲体系（10 mM KH₂PO₄/K₂HPO₄）-乙腈梯度洗脱的HPLC方法，采用X Bridge Shield RP18色谱柱（150×4.6 mm，3.5 μm），在254 nm检测波长下实现BLS与五种杂质（羟基杂质、酸杂质、二酸杂质、BS-IMP-01和BS-01）的基线分离。研究创新性地运用质量源于设计(QbD)理念，通过Design-Expert 13软件进行三因素（流速、柱温、缓冲盐浓度）两水平全因子设计（含3个中心点），建立19次实验的稳健性验证方案。

关键技术包括：1）采用强制降解实验验证方法特异性；2）通过LOQ-LOD实验确定检测限（0.009-0.056 μg/mL）；3）运用QbD原则评估关键方法参数(CMPs)对分离度的影响；4）采用ANOVA分析验证模型显著性。

【色谱优化】通过对比不同缓冲体系（磷酸盐/醋酸铵/甲酸铵）和有机相（乙腈/甲醇），最终确定磷酸盐-乙腈体系可获得最佳分离效果，60分钟内完成分析（梯度程序：0-15 min 20-35%B，33 min 62%B）。

【方法验证】特异性实验显示所有杂质与主峰分离度>2.0（羟基/酸杂质分辨率2.27）；线性范围0.16-0.61 μg/mL（r>0.999）；精密度RSD为0.53-1.97%；溶液稳定性达72小时（偏差<10%）。

【稳健性研究】ANOVA分析表明流速对关键分离度（R1-R3）影响显著（p<0.05），三维响应面图显示在流速0.9-1.1 mL/min、柱温35-45°C、缓冲盐8-12 mM范围内方法稳健。

【强制降解】氧化条件（30% H₂O₂，60°C）下产生15.66%降解产物，显著高于其他条件（酸/碱/光/热降解杂质均<0.5%），证实二酸杂质为关键降解产物。

该研究建立了首个能同步定量BLS五种杂质的标准化方法，其创新性体现在：1）将可检测杂质数量从文献报道的2-4种提升至5种；2）首次应用QbD理念系统评估方法稳健性；3）确定的色谱条件（流速1.0 mL/min、柱温40°C、10 mM磷酸盐）为工业化生产提供了可靠的质量控制方案。研究成果不仅满足了USP 621和ICH Q2(R1)的法规要求，更为第二代抗组胺药的杂质控制建立了新标准，对保障临床用药安全具有重要意义。