骨髓浸润淋巴细胞体外扩增激活技术展现对多发性骨髓瘤细胞的特异性杀伤潜能

本研究针对多发性骨髓瘤(MM)免疫治疗中肿瘤特异性T细胞来源受限的难题，开发了基于抗CD3/CD28磁珠联合IL-2/IL-7/IL-15的骨髓浸润淋巴细胞(MILs)体外扩增激活技术。研究证实扩增激活的eMILs具有高比例CD8+中央记忆T细胞(Tcm)和显著降低的Treg/MDSC比例，对自体CD138+ MM细胞展现特异性杀伤作用，为MM免疫治疗提供了新策略。

　　

多发性骨髓瘤(MM)作为一种恶性浆细胞疾病，其治疗面临严峻挑战。尽管近年来嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)疗法取得突破，但仍存在肿瘤逃逸、细胞耗竭等问题。更棘手的是，骨髓(BM)微环境中存在的调节性T细胞(Treg)和髓系来源抑制细胞(MDSC)构成了强大的免疫抑制屏障，使得常规免疫治疗效果受限。这些瓶颈促使科学家们寻找更具肿瘤特异性的T细胞来源。

韩国全南大学和顺医院(Chonnam National University Hwasun Hospital)的研究团队将目光投向了骨髓微环境中的特殊群体——骨髓浸润淋巴细胞(MILs)。这些天然浸润在肿瘤微环境的淋巴细胞被认为具有识别肿瘤相关抗原的先天优势，但如何高效扩增并保持其抗肿瘤活性是重大技术挑战。研究人员开发出创新性的体外扩增方案，通过抗CD3/CD28磁珠联合细胞因子(IL-2/IL-7/IL-15)培养系统，成功激活并扩增MILs，获得具有显著抗MM活性的效应细胞。

研究采用19例新诊断MM患者的骨髓样本，通过Ficoll密度梯度离心分离骨髓单个核细胞(BMMNCs)，磁珠分选CD138⁺骨髓瘤细胞作为靶细胞。关键实验技术包括：流式细胞术分析细胞亚群比例及检查点分子表达；乳酸脱氢酶(LDH)释放实验和CFSE标记法检测细胞毒性；IncuCyte活细胞成像系统进行长期杀伤监测；酶联免疫吸附试验(ELISA)定量细胞因子分泌。

研究结果部分显示：

1. 体外扩增和激活的MILs特征：采用新型培养方案后，eMILs在14天培养期内实现55.7倍扩增，CD8⁺ T细胞比例提升至59.8%，其中80%为具有持久免疫记忆功能的中央记忆T细胞(Tcm)。值得注意的是，PD-1、TIGIT等免疫检查点分子表达显著降低。

2. 免疫抑制细胞的有效清除：eMILs中Treg和MDSC比例较外周血淋巴细胞(ePBLs)显著降低，在培养第14天几乎完全消失，创造了更有利的抗肿瘤免疫环境。

3. 优越的肿瘤特异性杀伤能力：与ePBLs相比，eMILs对自体CD138⁺原代MM细胞展现出更强的细胞毒性，LDH释放实验显示特异性杀伤率显著提高。MHC I类抗体阻断实验证实这种杀伤作用依赖于T细胞受体(TCR)介导的抗原识别。

4. 长期抗肿瘤效果：IncuCyte活细胞监测显示，eMILs能持续清除U266和RPMI8226骨髓瘤细胞系，72小时内维持高效杀伤活性。

这项研究的突破性发现为MM免疫治疗提供了新思路。eMILs具有三大显著优势：首先，其天然存在于肿瘤微环境，具有多克隆抗原特异性，可减少肿瘤逃逸；其次，高比例Tcm细胞预示更好的体内持久性；再者，操作简便，仅需5-10mL骨髓样本即可获得治疗剂量。与常规CAR-T相比，这种非基因修饰方法避免了复杂制备流程和细胞因子风暴风险。

特别值得注意的是，研究团队优化的细胞因子组合(中等剂量IL-2联合IL-7/IL-15)有效避免了传统高剂量IL-2导致的T细胞耗竭，这解释了为何能获得高达80%的Tcm比例。这一技术参数对临床转化具有重要指导价值。

尽管缺乏体内实验数据，但研究通过严谨的自体原代细胞验证体系，充分证明了eMILs的治疗潜力。正如通讯作者Je-Jung Lee教授强调的，这种"利用肿瘤微环境自身资源对抗肿瘤"的策略，不仅适用于MM，也为其他血液恶性肿瘤的免疫治疗提供了范式参考。该团队正在积极开发CAR-MILs技术，有望进一步突破现有疗法的局限性。