基于TmodTM技术的NOT门调控T细胞活化与增殖机制及其在肿瘤靶向治疗中的应用研究

为解决肿瘤靶向治疗中因靶点缺失导致的脱靶毒性问题，A2 Biotherapeutics团队开发了基于CAR/TCR激活器和LIR-1抑制受体的双受体NOT门TmodTM技术。研究表明该技术能精准识别MHC I类蛋白缺失的肿瘤细胞，在3D类器官和小鼠模型中展现优异的选择性杀伤效果，为克服20%肿瘤基因LOH（杂合性缺失）的临床难题提供了新方案。

　　

在肿瘤免疫治疗领域，靶向识别始终面临"脱靶效应"这一致命难题。约20%的实体肿瘤存在染色体杂合性缺失(LOH)，导致关键抗原表达异常。传统CAR-T细胞常因误伤正常组织引发严重毒性，这种"敌我不分"的特性极大限制了临床应用。如何让免疫细胞像配备智能识别系统的精确制导武器，成为领域内亟待突破的科学瓶颈。

A2 Biotherapeutics的研究团队创新性开发了Tmod^TM技术平台，这种合成生物学NOT门系统由两个核心元件构成：基于嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)的激活模块，以及源自白细胞免疫球蛋白样受体1(LIR-1)的抑制模块。当靶细胞同时存在肿瘤抗原和MHC I类分子时，抑制信号会覆盖激活信号；只有当肿瘤抗原阳性且MHC I类分子缺失（如HLA-A*02等位基因缺失）时，T细胞才会启动杀伤程序。这种双重验证机制犹如为免疫细胞安装了"生物逻辑门"，使其能精准识别LOH这一肿瘤特异性标记。

研究采用多组学技术联用策略：通过流式细胞术定量分析T细胞活化标志物CD69和CD25的表达动态；采用延时活细胞成像追踪Tmod细胞在3D肿瘤球体中的浸润行为；建立人源化小鼠模型评估体内抗肿瘤效果；并运用单细胞RNA测序解析信号通路变化。实验特别设计了mRNA梯度转染的HeLa细胞模型，精确控制抗原表达水平以验证系统灵敏度。

在"Tmod constructs exhibit similar sensitivity vs. CARs in Jurkat cell assays"部分，研究揭示虽然HER2 Tmod细胞的急性杀伤效能略低于传统CAR-T（EC₅₀相差约1.5倍），但其选择性指数提升超过100倍。通过改造LIR-1受体的免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)，证实约15%的基线激活来自非配体依赖机制。在三维共培养模型中，Tmod细胞能穿透MHC I⁺细胞外层，精准清除核心区的MHC I^-肿瘤细胞，这种"外科手术式"的清除模式在PDX模型中得到验证。

讨论部分指出，Tmod技术突破了传统"正向选择"靶向策略的局限，开创性地利用肿瘤特异性抗原缺失特征实现负向选择。与合成致死等组合策略相比，该系统的模块化设计允许灵活更换不同HLA等位基因对应的 blocker抗原，已成功测试包括HLA-B07、HLA-C07在内的多种变异体。值得注意的是，研究还发现LIR-1的抑制效果存在"信号阈值"，当激活信号强度超过特定临界值时，抑制效应会被部分突破，这为后续优化提供了重要参数。

这项发表于《Cytotherapy》的研究标志着肿瘤免疫治疗进入"逻辑门控"新阶段。通过将计算机科学的逻辑运算概念引入细胞工程，Tmod平台为解决实体瘤治疗中的脱靶毒性难题提供了创新解决方案。其技术优势不仅体现在当前针对HER2阳性肿瘤的应用，更在于可扩展的平台特性——通过更换不同的激活/抑制受体组合，有望覆盖乳腺癌、结直肠癌等多种存在LOH特征的恶性肿瘤。随着临床转化的推进，这种"以缺失为靶标"的反向思维或将重塑肿瘤精准治疗格局。