基于三重实时荧光PCR技术的六种食用昆虫同步检测方法开发与验证

为解决食用昆虫过敏原标识不准确问题，韩国研究人员开发了两套三重实时荧光PCR检测体系，可同步检测大米蝗虫等6种获批昆虫成分，检测限达0.002 ng DNA/0.1%饼干添加量，为复杂食品基质中的昆虫物种鉴定提供了高效解决方案。

　　

随着全球人口增长和肉类消费增加，食用昆虫因其高蛋白、低环境影响的特性成为新兴食品原料。韩国食品药品安全部已批准大米蝗虫(Oxya japonica)、家蚕(Bombyx mori)等6种昆虫作为食品成分。然而亚洲地区7.6%-22.2%的消费者报告了由昆虫引发的过敏反应，包括哮喘、瘙痒甚至过敏性休克。研究显示昆虫过敏原如原肌球蛋白(tropomyosin)与甲壳类存在交叉反应，而加工过程中昆虫常被制成粉末，导致33.3%的市售产品存在标识错误。

韩国食品研究院的研究团队在《Food Control》发表研究，开发了两套基于三重实时荧光PCR的技术方案。研究人员选取46种样本（含6种目标昆虫及其近似种），针对线粒体细胞色素c氧化酶亚基I(COI)基因设计特异性引物探针。通过优化反应体系，建立同步检测大米蝗虫、双斑蟋蟀(Gryllus bimaculatus)、家蚕、黄粉虫(Tenebrio molitor)、独角仙幼虫(Allomyrina dichotoma)和白星花金龟幼虫(Protaetia brevitarsis)的方法。

特异性验证
测试46个样本显示，两套三重检测体系均无交叉反应，能准确区分目标昆虫与蟋蟀(Acheta domesticus)等近似种，以及小麦、甲壳类等常见过敏原。

灵敏度测试
在DNA水平检测限达0.002 ng，在饼干基质中添加0.1%昆虫成分仍可检出，较传统单重PCR效率提升3倍。

实际应用
成功鉴定12种市售昆虫加工品中的目标物种，包括粉末、蛋白棒等深加工产品，证实方法对复杂基质的适用性。

该研究首次建立针对韩国批准食用昆虫的多重PCR检测体系，采用潜在过敏原编码基因而非常规线粒体基因，为食品过敏风险管理提供新工具。方法符合欧盟2015/2283法规要求，可支持"含昆虫成分"的标签声明验证。未来可扩展至欧盟批准的黄粉虫等物种检测，助力全球昆虫食品监管标准化。研究获韩国食品药品安全部(RS-2024-00333074)资助，相关技术参数已提交韩国食品标准审议委员会评估。